微波水解衍生高效液相色谱法测定西洋参中的氨基酸.pdfVIP

第 37 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第 5 期 2ω9 年 5 月 Chínese loumal of Analytical Chemistry 685 阳 690 微波水解衍生高效液榈色谱法测定西洋参中的氨基酸 渠琛玲玉秘成 白雨萍游景艳张寒琦. (吉林大学化学学院，长春 13∞12) 摘 要 用微波辅助提取酸水解西洋参巾的蛋白质，对生成的氨基酸进行微波衍生后用高效液栩色谱法进 行测定。对微波衍生条件和微波水解的条件进行了优化。研究结果表明， 190 t, IS min 微波水解得到氨基 酸的产率与传统加热水解(1l0 C, 24 川的结果基本相同。用2 ，4-二硝基氟笨(DNFB)对氨篡酸进行微波衍生， 氨基酸在微波衍生时间大于208 时，衍生反应基本完全;ìiíi传统 DNFB 衍生常在ω 吃水浴加热 1 h ，所以微波 衍生法明援缩短了氨猿酸分析时间。用高效液相色谱法对西样参根中的氨基酸进行了测定，结果令人满意。 关键词 微波水解，微波衍生，氨基酸，高傲液相包谱，西祥参， 2 ，4-工硝篡氟苯 1 引|亩 氨基酸是蛋白质的组成部分。由于辄基酸分析在蛋白质化学、生物化学、食品科学、l临床医学等领 域的研究中起到震耍的作用，因此，对氟幕酸分析ñft;; 的研究得到人们高庶震视[1 -4] 。 水解蛋白质测定氨基酸的传统方法是在6 moνL HCl 中， 110 CC 下加热24 ho 吗娅等[5] 在 160 CC 、 不同橄榄功率和时间的条件下对蛋白脆进行水解，并与传统的水解方法进行比较:穆草等问]果用正交 3 实验方法以风80 为水解介脆，施用微榄功率、H S0 浓度、水解时间作为 个带癖因紫研究蛋白质的 4 4 2 [7] 绵述了不同介质的强白质橄榄水解以及辄藕酸的损失情况。 水解。文献 柱前衍生高敢模相色谱法测定氨基酸由于具有分析时间较短、灵敏度高等优点，近年来被越来越 多地用于氨基酸分析，阳衍生荆的选择是这种方法的关键。常用的衍生荆有邻苯二甲醒(OPA) 、薪之， 3-工甲醋(NDA) 、9嗣捞甲基氯甲酸醋( FMOC) 、鼻硫辄酸苯酣(PITC) 、丹毗氯( Dansyl-Cl) 、4 ， 4-二叩股基 偶费现苯-4幡磺瞰氯( DABS-Cl) 和 6-辄藕邂琳-N刷报基唬躏酌亚脚碳酸盐(AQC) 等(8 -12] 。不阔的衍生荆都 有各自的不足，如 OPA 不能与仲氨酸反脏， FMOC 需用戊烧革取衍生完成后过剩的 FMOC ，使操作繁 琐。而 2 ， 4-二硝基氟苯(DNFB) 作为衍生荆具有戚本低、衍生产物稳定、操作简便等优点，常规的 DNFB 衍生是准 60 C水恪加她的条件下进付 1 ho 橄榄衍生气相色，谱分析近年来逐渐增多。朱丹等[13] 用动15 眼相微擎取俐微榄衍生化幡气相色谐崛选 择离子检测-质谱法测定了毛发中的苯丙腊粪毒品。而侯俊红等[14] 对苯丙股类的衍生化条件(包括徽 被情生)进行了分析。刘冬娴等[U] 用微植衍生气相色谱法检测了丁丙诺啡。而微被衍生用于液相色谱 分析却少见报道。 本研究将橄榄水解和衍生相结俞研究了西洋参中蛋白质的做被水解以及氨藕酸的做被辅助衍生， 考察了实验条件对微披水解和衍生的影响，建立了快速测定氨摹酸的方法，显薯缩短了氨基酸分析时 间，并为氟基酸的在钱衍生奠定了基础。 2 实验部分 2.1 仪器与试荆 11ω 高效榷相色谱仪(美国 Ailgent 公司)， WR乓橄榄样品处理系统(北京美诚科技有限公司) ; Heidolph 旋转葬在发仪。 18 种氨基酸(纯度均为 99%) .天冬氨酸(Asp) 、谷氨酸( Glu) 、丝氨酸(Ser) 、组 氨酸( His) 、精氨酸(Arg) 、苏氨酸(Thr) 、甘氨醺(Gly) 、脯氨酸( Pro