探针5-氨基水杨酸锌测定蛋白质的应用研究.pdfVIP

第28卷，第7期 光谱学与光谱分析 Vd．28，№．7，ppl596—1599 2oo and 8年7月 SpectroscopySpectralAmlysis July，2008 探针5-氨基水杨酸锌测定蛋白质的应用研究 崔凤灵，秦利霞，郝二军，王俊丽，王丽，’张强斋 河南师范大学化学与环境科学学院，河南新乡 453007 摘要在模拟人体生理条件下，基于5一氨基水杨酸锌(5一Asz)与血清白蛋白相互作用生成复合物，导致血 清白蛋白的内源荧光产生特异性变化，从而建立了以5一Asz为荧光探针，用固定波长同步荧光光谱分析测 定蛋白质(HSA)的新方法。同步荧光光谱特征及强度与出值、反应介质、反应温度等因素有关。在最佳实 验条件下，体系的同步荧光强度(k)与人血清白蛋白在1．66～496．8旭·mLl范围内呈良好的线性关系， 检测限为o．88烬·nlL_1(挖=11)。在此基础上对血清、尿样和唾液中的蛋白质进行了测定，加标回收率在 98．0％～103．8％之间。实验结果表明：该方法具有简单、快速、灵敏度较高、线性范围宽、精密度和回收率 较好等优点。该法直接用于样品中蛋白质总量的测定，获得了令人满意的结果，有望用于生化分析和临床分 析领域。 关键词5一氨基水杨酸锌(5一Asz)；人血清白蛋白(HSA)；同步荧光光谱；测定 中图分类号：0657．3文献标识码：A 文章编号：1000-059312008)07—1596．04 治疗溃疡性肠炎、结肠炎和克罗恩氏疾病的国家一类创新药 引 言 物，具高效、低毒等特点，其化学名为5一氨基一2一羟基苯甲酸 锌二水合物(Zinc 蛋白质是一类重要的生物大分子，在生物体内占有重要 经对5一Asz与人血清白蛋白的相互作用进行了研究，二者主 的地位，是生命的物质基础。蛋白质的定量测定是生物化学 要以疏水作用力相互结合[121。在此基础上以5一ASZ为荧光 和其他生命科学中经常涉及的内容，也是临床检验中诊断疾 探针测定了人血清、唾液和尿样中蛋白的含量，建立了测定 病及检查治疗效果的重要指标，又是许多生化药物分离提纯 人血清和尿样中蛋白含量的同步荧光光谱法，并作了回收实 质量检验中常见的分析项目，另外蛋白质的定量分析还是食 验。方法简便快捷，对临床医学和药代动力学上具有一定的 品检测的重要内容。所以蛋白质的定量测定在化学、生物、 实用意义和价值。 医药、食品等相关学科中已经成为一个热门的研究课题。 蛋白质中研究较多的是血清白蛋白，血清白蛋白是血浆 1实验部分 中最丰富的蛋白质，在生物体内起着重要的储存和运输作 用[1]。因此开展其分析测定方法及其临床方面的研究，有着 1．1主要仪器与试剂 非常重要的意义[20]。目前蛋白质的定量测定方法主要有分 型酸度计(上海雷磁仪器厂)，B§110S型电子天平(北京赛 光光度法[4’5]、荧光法‘乱73和共振瑞利散射法[8一]。同步荧光 光谱法作为一种新的分子光谱技术，对生物分析技术的发展 多利斯天平有限公司)，5一氨基水杨酸锌(5一ASz)2×101 起着非常重要的作用。近年来利用同步荧光光谱技术对蛋白 r∞I 质进行定量测定的报道还不多见。与普通荧光法相比，同步 ·L叫水溶液，置于1～4℃冰箱中保存，pH7．4的Tris_ 荧光法还具有光谱简化、谱带窄化和减小散射光影响的优 点，已成功应用于多组分的同时测定uo]和生物分子D1]的分的NaCl水溶液。所用试剂均为分析纯，实验用水均为二次 析研究中。