新型水溶性花菁双嵌染料荧光测定蛋白质的研究.pdfVIP

第2 Ⅷ．27，Nn 7卷，第9期 光谱学与光谱分析 9，ppl775—1779 20O7年9月 Amlysis SeDt唧ber．2007 Spectroscopy蚰dspec竹al 新型水溶性花菁双嵌染料荧光测定蛋白质的研究 林旭聪，郭良洽，林艳霞，谢增鸿’ 福州大学化学化工学院，福建福州350002 摘要基于蛋白质对双嵌花菁染料具有良好的荧光增强作用，以新型水溶性碳菁染1，l’-丙磺酸一3，3，3’， 3L四甲基吲哚三次甲基碳菁一5，5L=磺酸钾为荧光探针，建立了一种新的蛋白质荧光检测体系。实验考察 了探针的荧光特征、浓度、缓冲体系pH、盐浓度和乙醇有机试剂等参数对体系荧光的影响。当pH2．o，花 菁染料最大荧光激发波长为548f蛆，发射波长为562珊，血清蛋白与探针作用随着探针浓度的增加而加 强，荧光增强值逐渐上升；当探针浓度为I．00×10叫瑾盼卜L_1时，牛血清蛋白BsA和人血清蛋白HsA对 花菁探针荧光增强作用最为明显，体系荧光强度与蛋白质浓度成良好的线性关系，BSA和HsA线性响应浓 血清蛋白BsA的合成样品，当BsA浓度为4．00，6．oo，8．00旭·mL-1时，回收率为94．5％～103．3％． 关键词荧光测定I水溶性花菁染料}蛋白质 中图分类号：0657．3文献标识码：A 文章编号：1000-0593【2007)09—1275-05 敏、稳定的新型荧光探针检测蛋白质的新方法。 引言 1实验部分 蛋白质定量测定在生命科学、临床医学和化学研究中占 有十分重要的地位。目前，蛋白质检测方法有分光光度 1．1仪器与试剂 斟1阁，荧光光度法‘矧，化学发光法‘阳及电化学法∞等。荧 荧光光度计(variancary 光分析法选择性好、灵敏度高，在生物大分子分析等领域应 计(上海大普仪器厂． 用广泛‘}1目。结合高灵敏发光探针．选择或合成荧光试剂作 花菁染料，1，1’一丙磺酸一3，3，3’．3L四甲基吲哚三次甲 为外援荧光测定蛋白质，已在蛋白质分析测定中有较好的应 基菁一5，57-二磺酸钾(实验室合成)。 t上海)t人血清白蛋白(HAs， 用[协t2]． 牛血清蛋白(BsA，BR 双嵌花菁探针具有刚性平面结构．荧光性能良好，同时BR，sig眦)，于o～4℃保存。 mL0．10 又可以作为生物大分子的嵌人体；连接桥键后．双嵌花菁具 柠檬酸钠一Ha缓冲溶液(pH2．O)t移取3．o n1L O．10mo卜L_1盐 有多个探针结合点、良好的柔韧性，具有极高的亲和常rn01·L_1柠檬酸钠(AR)溶液及7．O lnL。 酸溶液，混和稀释至100 数‘埘．自1992年Rye等突破性地合成了性能独特的噻吩橙 同型花菁双嵌入剂以来，荧光花菁探针发展迅速[件川， 试剂均为分析纯，实验用水均为去离子水。