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新的吲哚类同型二聚体荧光探针测定蛋白质的分析研究.pdf

第26卷第12期 分析试验室 Ⅷ.26No.12 翌:王::: :!==j:=i!竺:=j兰生2:z 翌L:: 新的吲哚类同型二聚体荧光探针测定蛋白质的分析研究 林旭聪1,尹华2,郭良洽1,谢增鸿“ (1.福州大学化学化工学院,福州350002;2.幅州大学实验中心,福州350002) 摘要:采用新的水溶性吲哚类同型二聚体探针I,建立了一种新的蛋白质荧 光分析体系。在酸性条件下,蛋白质分子能与吲哚探针发生结合作用,体系荧 光明显增强并向长波方向发生红秽,荧光强度与蛋白质质量浓度呈良好的线性 关系。在最优条件下,牛血清白蛋白BsA的线性响应范围0.帅。2500一IIlL, 检出限(3一K)为005湖,mL;用于模拟样品的测定,1.00,2.00和5.00硝mL 的样品测定回收率为99.0%一1020%,相对标准偏差18%一28%;与国家 标准方法比较,结果测定偏差为1.0%~4.1%。 关键词:荧光测定;吲哚二聚体荧光探针;蛋白质 中图分类号:0657.3文献标识码:A 文章编号:10吣∞20(2∞7)12.00昏04 蛋白质分析在生命科学研究中占有重要地位, 质荧光测定技术具有良好的意义。 其分析方法的一直受到人们的关注…。目前测定 本文采用新的水溶性吲哚类双嵌探针I,考察 蛋白质的方法主要有紫外光谱法”】、化学发光 了该探针的特征光谱性能、pH和离子强度等因素 法“],荧光分析“01及电化学法”1等。荧光分析选 影响,研究了该探针与血清蛋白的结合反应,建 择性好、灵敏度高,在生物分子分析领域应用广 立了一种简便,灵敏、稳定的新型荧光探针检测 泛”’“。由于蛋白内源荧光弱,应用外源探针荧光 蛋白质的分析体系,并用于血清模拟样品的分析 法测定蛋白质,灵敏度高、操作简便,已广泛用于 测定,结果良好。 蛋白质的定量分析。吲哚类二聚体探针是一类以 P 吲哚杂环结构为主的新型生物荧光染料”J。该类 染料经过修饰改性后,形成的磺酸盐易溶于水, ,s磷硷鼢毡辫。 光稳定性好,荧光量子产率高,与蛋白质结合后 。 l 荧光显著增强,灵敏度高,适合作为生物大分子 的定量分析探针,已广泛应用于生物分子的标记 吲哚类探针I结构式 和检测”““。目前,吲哚类聚合体荧光探针发展 迅速,系列吲哚化合物荧光探针相继被开发并在 l实验部分 生物分析中应用,吲哚类聚合体探针已成为新一 1.1仪器与试剂 代的生物分子荧光探针”2卅“。发展前景十分广 阔。通过二溴丁胺桥键,二聚体吲哚类探针I是我 们新开发的一种性能稳定的长链水溶性磺酸吲哚 (上海)。 探针,迄今为止有关该染料的研究尚未见报道, 开展光谱性能分析及应用研究对于建立新的蛋白 成浓度为1.00f吲mL的贮备液,4℃保存;吲哚 收稿日期:2007.04.16;修订日期:2007.05—28 作者简介:林旭聪(1976一),男,讲师 一6一 专盏鬻;铲 嘶一舢髫感黧。。一。‰烯臻12 类探针I(实验室合成),以水配制成浓度为3.0×构紧密程度增加,嵌人结合在蛋白分子内部的探 针自由扭动现象受阻,探针能量传递效率

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