时间分辨化学发光测定微量蛋白质的研究.pdfVIP

V01．25 高等学校化学学报 Suppl． 2 004年4月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 161～162 时间分辨化学发光测定微量蛋白质的研究 李正平1，范双双1’2，张丽娜1，石生勋1 (1．河北大学化学与环境科学学院，保定071002；2．承德民族师范学院化学系，承德067000) 关键词时间分辨技术；化学发光测定；微量蛋白质 随着对蛋白质组学研究的发展，需要分离、鉴定更微量的蛋白质组分．常规的蛋白质分析方法(如 有较高的灵敏度，但需要昂贵的荧光探针或复杂的操作过程．蛋白质与Cu(Ⅱ)的不饱和配合物对 Luminol化学发光反应具有强烈的催化作用，据此，应用流动注射分析(FIA)可测定0．1pg／ML的蛋 白质的灵敏度提高约1个数量级． 图1是Cu(1I)及蛋白质和Cu(Ⅱ)配合物在 j pH=9．6的硼酸盐缓冲溶液中的CL动力学曲线， 茹 S 台 a和c是溶液中自由Cu(11)的CL信号，它在0．6 咎 皇 达到最大并很快衰减．b和d分别是Cu(OH)。及 占 一 Cu(Ⅱ)和蛋白质配合物的CL信号，分别在102．5 o S和72．0S达到最大，并缓慢衰减．由此可见，应 用时间分辨方法，可以很容易地分辩并测量由蛋白 质产生的CL信号． 在所选的实验最佳条件下，将蛋白质样品与 Chemiluminescence for Fig．1 intensity—timeprofiles 1×10-5 mol／L的Cu(Ⅱ)在H3803一NaOH缓冲溶 1×10—5mol／L Cu(Ⅱ)and1．0 BSA(B) 液中混合，于室温放置45min．将100弘L混合液 IJg／mL Bothin0．002 bufferwith 与200肚LCL试剂混合并立即在BPCL化学发光分 mol／LH3803一NaOH ph一9．6． TheCL consistsof5×10—4mol／LLuminol， 析仪中测量CL信号，由此可以灵敏地测定0．01～ reagent 1×1 0．01 0一mol／LHz02，andmol／LNazC03一NaHCOa 5．0弘g／mL的牛血清蛋白(BSA)．有关线性方程、 buffer(pH=11．4)． 检出限及相关系数列于表1． V。 Ta