普鲁士蓝增敏压电均相免疫分析法测定免疫球蛋白G.pdfVIP

第40卷 分析化学(FENXlHUAXUE)研究报告 第6期 2012年6月 ChineseJournalofAnalytical ’ 847～85l Chemistry 普鲁士蓝增敏压电均相免疫分析法测定免疫球蛋白G 代薇薇12莫志宏¨名3 张静l3李先丽12赵娜l，2 (新型微纳器件与系统技术国家重点学科实验室1，化学化工学院2，生物工程学院3重庆大学，重庆400044) 摘要建立了普鲁士蓝增敏的均相压电免疫分析法，用于人尿液中免疫球蛋白G(IgG)的检测。本方法以 蛋白质为种子，形成蛋白质一普鲁士蓝粒子，该粒子不断“滚雪球”增大，使得压电检测信号明显放大。在 4．0、盐浓度0．1 rnm01／L mmol／L pH m01几5 FeCl3，2．5 速度为0．5 nmoFL；检出限为2．4 pL，s的优化条件下，IgG的检测范围为0～625 nmoVL。d。一微球蛋白，岛一微球 蛋白、尿微量白蛋白均无明显干扰，本方法用于临床样本的IgG测定，并与免疫比浊法进行对比，两者结果一 致，表明本方法可行。 关键词均相免疫分析；压电检测；普鲁士蓝；lgG 1 引 言 压电免疫传感器具有实时、非标记、简便等特点，已引起广泛关注【l捌。如Ding等恻采用金／羟磷灰石 纳米复合材料固定抗体的压电免疫传感器实现了口一胎蛋白的检测；Cheng等㈣采用固定免疫球蛋白 (IgG)的压电免疫传感器实现了血吸虫循环抗原的检测；March等”1采用电极表面固定抗体的压电免疫 传感器基于竞争性结合实现了果汁中杀虫剂残留物等的检测。但压电免疫传感器需在电极表面固定蛋 白，存在着稳定性差、重现性不好等问题，限制了其实际应用。 压电均相免疫分析是在溶液中直接对免疫反应进行检测，具有重现性、稳定性好的优点，但灵敏度 低，因此采用信号放大提高灵敏度成了近年的研究热点。如Ghourchian等嘲基于胶乳增敏的免疫凝集 反应测定类风湿因子；Aizawa等即实现了低于10 mg／L纤维蛋白原的检测；莫志宏等嘲以金纳米粒子修 饰抗体，利用纳米探针免疫凝集反应测定了lgG，其检出限为0．1lmg／L。 基于种子生长法的思想，本研究提出信号放大压电均相免疫分析方法。种子生长法与压电生物传 感的结合最早见于Willner等的研究，他们基于传感器表面所捕获纳米金探针的催化自生长实现信号放 大，并主要应用于DNA检测M0】，但未见用于蛋白质检测。通过铁蛋白中所含Fe”与Fe(CN)。4。形成难 溶性普鲁士蓝，在蛋白质核磁共振成像中实现信号放大“1t”。本研究以IgG检测为例，设计了普鲁士蓝 增敏的压电均相免疫检测方法。即以带正电荷的蛋白质为种子，通过静电作用吸附Fe(CN)。4。，再与 Fe3+在其蛋白质表面生成普鲁士蓝，形成蛋白质一普鲁士蓝(P—PB)粒子，该粒子不断“滚雪球”增大，实现 nmol／L，实现了非酶促的 了压电传感器响应的明显放大，如图1所示。本方法对IgG的检出限可达2．38 免疫分析信号放大。同时，本方法为非表面均相反应，确保了检测的重现性和稳定性，而且可用于非铁 蛋白的增敏分析。 2实验部分 2．1仪器与试剂 360 特定蛋白分析仪(美国Beckman-Coulter公司)；PowerBC1000EN电泳仪(上海博彩生物科技有限公司)； LPH-802 201 1—09-07收稿；201卜12-13接受 本文系国家高技术研究发展计划(2008AA042310)资助 ‘E-mail：zhikmo@cqu．edu．cn 分析化学 第40卷 (美国Beckman-Coulter公司)：FeCl3等试