柱切换高效液相色谱法测定人血浆中布洛芬对映体浓度.pdfVIP

第36卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第3期 Chinese of 311—315 2008年3月 Journal AnalyticalChemistry 柱切换高效液相色谱法测定人血浆中布洛芬对映体浓度 向瑾 余勤 梁茂植‘ 秦永平 南峰 (四川大学华西医院GCP中心临床药理研究室，成都610041) 摘要建立了柱切换高效液相色谱法测定人血浆中布洛芬对映体浓度的方法。以对溴苯甲酸为内标。样品 经醋酸钠缓冲液酸化后，用y(正己烷)：y(异丙醇)=95：5萃取。以ChiralcelOJ—H拄(DaicelChemicals， 250姗×4．6 nllll，5岫)为分析柱，UhimateTMSiO柱(50聊×4．6mm，5岬)为预处理柱；流动相为 y(正己烷)：V(异丙醇)：以三氟醋酸)=96．5：3．5：0．1，流速为0．5mL／min；预处理流动相为以正已烷)：y(异 丙醇)=99．5：1，流速为1mL／min；柱切换时间为1．70—4．09min；紫外检测波长为230姗。布洛芬消旋体和 S·(+)一布洛芬标准曲线线性范围分别为0．21—20 mg／L和0．10—10rag／L；日内RSD小于6．5％，日间RSD 小于6．1％；方法回收率为93．3％一107．1％，萃取回收率为80．O％一86．6％。本法简便、准确，重现性好，可 用于布洛芬对映体人体药代动力学研究。 关键词布洛芬，手性，血浆浓度，柱切换，高效液相色谱法 1 引 言 当药物分子结构中与碳原子相连接的4个原子或基团互不相同时，该药物称为手性药物。建立快 速、准确、灵敏的对映体拆分方法为评价手性药物各对映体的生物活性提供了关键的技术手段。在生物 样品中，手性药物及其代谢物的含量极微，且易受到大量内源性成分的干扰，分离测定难度较大¨，2】。 程存在显著的差异L3西J。体外实验表明其右旋体的药理作用是左旋体的160倍，但在体内仅为1．4倍， 主要原因是在体内无活性的R．(．)．布洛芬转化为活性的S．(+)一布洛芬，因此布洛芬对映体的拆分测定 十分必要。目前测定布洛芬对映体血药浓度的方法主要有：高效液相色谱法(HPLC)“21，毛细管电泳 MS／MS)H纠联用技术也应用于布洛芬对映体血药浓度的测定；其中以手性固定相高效液相色谱法 (CSP)最为常用。常用的手性固定相为AGP柱一刮、AD柱【Io．¨1等。oJ．H手性柱是纤维素类手性柱， 适宜于分离甲基芳基酯和甲氧基芳基酯化合物u5。，目前尚未见使用该手性柱分离测定人血浆中布洛芬 对映体的相关报道。本研究建立了柱切换HPLC法测定人血浆中布洛芬对映体的方法，特异性好，灵敏 度高，准确度好，同时能有效保护手性柱，可用于布洛芬对映体药代动力学研究。 2 实验部分 2．1仪器与试剂。 VP6．12色谱数据 SIL．10ADvp自动进样器、SPD．10Avp可变波长紫外检测器、FCV一12AH切换阀及Class 工作站。 100．0％(m／m)，批号分别为：SKF 实验中所用试剂试药除正己烷、异丙醇、三氟乙酸和甲醇为色谱纯外，其余均为分析纯。 2．2储备液配制 称取布洛芬对照品lomg、s．(+)．布洛芬对照品5mg，各置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定 20074)6-20收稿；2007-09-30接受 ·E-mail：sunny9996@tom．tom 312 分析化学 第36卷 容至刻度，即得布洛芬储备液(1000ms／L)和S-(+)-布洛芬储备液(500ms／L)，储存于 一30℃冰箱备用。临用时分别用色谱纯甲醇分别稀释为标准系列工作液。 称取对溴苯甲酸5 mL容量瓶，即得内标储备液(200mg／L)，储存于