柱前衍生-反相高效液相色谱法测定2-去氧葡萄糖的含量.pdfVIP

第40卷 分析化学(FENXIHuAxuE)研究简报 第5期 2叭2年5月 ChineseJournalof Chemistry 782～786 Analytical 柱前衍生一反相高效液相色谱法测定2一去氧葡萄糖的含量 尤小云1’2 洪碧红q’4 谢全灵2 易瑞灶112许瑞安1。 (华侨火学分子药物学研究所，泉州362021)2(国家海洋局第三海洋研究所，厦门361005) 3(分子药物教育部工程研究中心，厦门市海洋与基冈丁程重点实验室，厦门361021) 4(厦门大学化学化工学院材料科学与工程系，厦门361005) 摘 要 采用对氨基苯甲酸乙酯为衍生化试剂，建立柱前衍生化反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定2_去氧 葡萄糖的含量。结果表明，最适的衍生化条件为反应温度85℃，反应时间1．5h，衍生化试剂(ABEF)和单糖 ODs2(250mm×4．6mm，5 (2一DG／Glu)的摩尔比为25：1；色谱条件为色谱柱Hypersil um)，流动相为O．02％ TFA一乙腈(80：20，V／V)，流速1．0mL／min．波长307nm。本方法存l～700m2几浓度范围内与峰面积呈良好的 9999)；定量限(S／N一10)及检出限(3／N3)分别为450和100 线性关系(r—O ug／L；平均加标回收率为 1叭．7％；RSD为0．7％；日内及日问精密度均小于0．7％。表明本方法灵敏度高，测定结果准确，重复性好，可用 于2-去氧葡萄糖样品的准确定量分析。 关键词 2一去氧葡萄糖；柱前衍生；反相高效液相色谱法；对氨基苯甲酸乙酯 1 引 言 病毒、抗菌、抗衰老、止血及镇痛等”。1多种生理药理效应，在医药、食品、化妆品及科学研究领域”’41具有 广阔的应用前景。建立2一DG的快速定量方法，对糖生物学与糖医学等科学研究及应用具有重要意义。 2一DG的检测方法有离了色谱法和梓前衍生高效液相色谱法氍61。前者方便、准确，但通用性不佳；后 者不仅测定结果准确，还可以克服其缺点。文献[6】曾采用对氨基苯甲酸乙酯(p—Aminobenzoicethyl 9．o的 ester，ABEE)衍生化法分离分析2一去氧葡萄糖，但所采用的色谱柱是耐碱性的c。。柱，流动相为pH 2．65)一乙 硼酸钾缓冲液．这对常用的C，。柱(pH一2．O～8．0)几乎不适用。本研究采用O．02％三氟乙酸(pH 腈为流动相，适用于几下所有c，。柱，并以等度洗脱代替梯度洗脱，缩短分析时问；文献[7～9]报道过的 6 ABEE衍生化法所用的糖浓度都较高(25mmol／L)，未见采用低浓度糖溶液衍生化的方法。本研究建 立的低浓度(2mmol／L)糖溶液衍生化的方法，为低浓度糖溶液的衍生化提供了参考。本研究采用柱前 衍生反相高效液相色谱法同时分离分析2去氧葡萄糖和葡萄糖，方法具有通用性广、分析时间短、灵敏 度高、测定结果准确、稳定性好等优点。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 Alliance MicroMassLcT VERTEx Premier“xE高分辨质谱仪(美国waters公司)；Bruker70红外光谱仪；Bruker 400核磁共振仪(德国Bruker公司)。 (分析纯，西陇化工股份有限公司)；超纯水(电阻率≥18．2MQ-cm，自制)。 201l一07_01收稿}2叭卜11—23接受 本文系海洋公益性行业科研专项经费基金(No．201005020)，福建省科技重大专项经