柱前衍生-反相高效液相色谱法测定人血白蛋白中辛酸钠含量.pdfVIP

第38卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报 第3期 of 425—428 2010年3月 ChineseJournalAnalyticalChemistry DOI：10．3／24／SP．J．1096．加10．螂 柱前衍生-反相高效液相色谱法测定人血白蛋白中辛酸钠含量 蒋翠岚1，2 王立娜1 韩继红2 蒋晔¨ 1(河北医科大学药学院分析化学教研室，石家庄050017) 2(河北化工医药职业技术学院制药系，石家庄050026) 摘要建立了柱前衍生．反相高效液相色谱法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法。用正已烷萃取人血白 蛋白中的辛酸钠，与∞．溴苯乙酮和18．冠石醚在50℃反应30mill，然后用甲醇-水(75：25，V／V)于Nova-Park mill×3．9 C18柱(150 mm，4tm)上分离，在262nm检测衍生物，流速为1．0m[JmJn，庚酸为内标。辛酸和庚 酸的萃取率可分别达到98．2％和97．9％，RSD小于0．9％。方法的线性范围为9．00×10一一1．44× 白中辛酸钠含量的测定。 关键词柱前衍生；反相高效液相色谱法；人血白蛋白；辛酸钠 1 引 言 人血白蛋白制品在生产过程中，需在60℃进行病毒灭活处理10h。为了防止蛋白质发生高温变 性，需加入适量辛酸钠作为保护剂。辛酸钠浓度过高可能导致白蛋白制品发生不良反应，如抑制血小板 凝聚、引起低血糖症、抑制肝脏对长链脂肪酸的消除等…；辛酸钠浓度过低不能起到稳定制品的效果， 故应选择合适的方法准确测定其含量，以保证白蛋白制品的安全性。传统方法是采用气相色谱法【lqJ， 但此法进样量小、误差大。另有离子排斥色谱法【61和酸碱滴定法[．71，但后者混合溶解液影响终点判 定【8J。反相高效液相色谱法作为一种高效、快捷的通用分析方法，未见其在辛酸钠分析方面应用，原因 可能是辛酸钠本身无紫外吸收，无法直接用通用紫外检测器进行检测。本研究建立了以∞-溴苯乙酮为 衍生试剂，将辛酸钠衍生后用反相高效液相色谱法测定其含量的分析方法，测定可在10min内完成，分 析速度快、结果准确、重现性好，可用于人血白蛋白中辛酸钠含量测定。 2实验部分 2．1仪器与试剂 液相色谱仪系统包括：Spectra—Physics8810泵、Spectra-Physics8450检测器(美国)，HW色谱工作站 (南京千谱软件有限公司)；LDZ24-0．8离心机(北京医用离心机厂)；XW-80A旋涡混合器(上海医科 大学仪器厂)；XW-80 T氮吹仪(上海泉岛公司)。甲醇(色谱纯，美国Fisher A恒温干燥箱；QCC一12 6醚(A11249)；其它试剂均为分析纯；水为重蒸去离子水。人血白蛋白(山东泰邦生物制品有限公司， 司，批含量20％)。 2．2实验方法 2．2．1对照品溶液的制备准确称取41．6嘴辛酸对照品于10mL容量瓶中，加水超声溶解，摇匀，定 容，即得对照品贮备溶液。临用时逐级稀释，配制成系列浓度对照品溶液。 2．2．2内标溶液的配制准确称取9．40mg庚酸，加水溶解并定容至10mL，得内标贮备液，浓度为 2009-07-28收稿；2009．11-06接受 ·E-mail：jiangye@hebmu．edu．cn 426 分析化学 第38卷 7．20×10～mol／L。准确量取贮备液5mL，稀释至10mL，得内标溶液。 2．2．3衍生试剂溶液的配制准确称取25．3 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，得 mgto一溴苯乙酮于5 0．0250 mol／L衍生试剂溶液，密封保存。 2．2．4供试品溶液准确量取lmL人血白蛋白溶液于5mL容量瓶中，加水溶解并定容，得供试品溶液。 2．2．5样品处理及衍生化反应