柱前衍生-高效液相色谱分离测定及质谱鉴定脂肪胺.pdfVIP

第35卷 分析化学(FENxlHUAXuE)研究报告 第6期 of Chine卵Joumal 779—785 2007年6月 AnalyticalChelllistry ；…’。…‘。…’。…。’…‘‘…‘。…‘。…‘； ；研究报告； i…．．…．．…．．…．…．．…．．…．．…： 柱前衍生一高效液相色谱分离测定及质谱鉴定脂肪胺 赵先恩1’3 李玉林1’3 尤进茂1’2 刘永军1 索有瑞“、 1(中国科学院西北高原生物研究所，西宁810001)2(曲阜师范大学化学科学学院，曲阜273165) 3(中国科学院研究生院，北京100039) 摘要采用新型荧光衍生试剂2一(2一苯基一1一氢一菲[9，10—d]咪唑)-乙酸(PP认)进行柱前衍生，经荧光检测 实现了脂肪胺的高效液相色谱(HPLC)分离测定及柱后质谱鉴定。60℃下在乙腈溶剂中用肛乙基-∥-[(3- 二甲氨基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDc)做缩合剂，衍生反应15min可获得稳定的荧光产物。脂肪胺衍生物 荧光检测波长为380nm(激发波长为260nm)。在EclipsexDB—c。色谱柱上，采用梯度洗脱对12种脂肪胺衍 生物进行了优化分离，测定了造纸厂废水、大鼠端脑和酸奶中脂肪胺的含量。经柱后在线质谱大气压化学电 离源(APcIS0urce)正离子模式实现了各种脂肪胺衍生物的质谱鉴定，借助对活性中间体的质谱解析确定了 衍生反应的反应机理。该方法具有良好的重现性和回收率，多数脂肪胺的线性回归系数大于O．9996；检出限 为3．1～18fmol(S／Ⅳ=3：1)。 关键词高效液相色谱．质谱，荧光检测，柱前衍生，脂肪胺 1 引 言 脂肪胺广泛分布于自然界中。大多数胺类化合物包括脂肪胺是由蛋白质、氨基酸和其它含氮类有 机化合物通过生物降解而成，挥发性有机胺在亚硝化剂的存在下易形成强致癌性的Ⅳ一亚硝基化合 物H’2]。脂肪胺的痕量测定对临床医学、环境检测与控制、食品检验和生物学等具有重要意义。 脂肪胺通常为无紫外吸收或本身不具发光特性的化合物，进行化学衍生是提高其检测灵敏度的有 效途径。国外用于测定脂肪胺荧光衍生试剂的报道较多，但存在不同的缺陷，如邻苯二甲醛(OPA)b1 差，见光易分解，6一氨喹啉基一^L琥珀酰亚胺碳酸酯(AQc)o是近年来广泛应用的胺类衍生试剂，但其在 水中的荧光量子效率很低，不利于梯度洗脱。氯甲酸-9．芴甲酯(FMOC．C1)№J虽然广泛应用于氨基类化 合物的柱前衍生，但衍生化后需经萃取消除过量试剂的干扰，操作繁琐且易造成疏水衍生物的丢失。该 类试剂的优点是衍生速度快、产率高，但衍生试剂难合成、易水解一’8’。受肼基荧光衍生试剂在EDC作 用下高灵敏衍生脂肪酸的启示【9]，在前期工作的基础上【l们，合成了更灵敏、更易质谱离子化的2．(2-苯 借助柱后在线质谱实现了快速定性并讨论了衍生反应机理。结果表明，该衍生试剂灵敏度高、稳定性 好，衍生反应简单且产率高，过量试剂不干扰分离，衍生溶液不必预处理可直接进样分析。 2实验部分 2．1仪器与试剂 1100 TmpsL型高效液相色谱一质谱联用仪(美国A舀lent公司)，配备四元梯度泵、在线真空脱气机、 荧光检测器、100位自动进样器、大气压化学电离源(APCI mm× Source)；EclipseXDB—C8色谱柱(4．6 2006一10-25收稿；200r7J02J02接受 本文系中国科学院百人计划及中国科学院“西部之光”人才培养计划项目资助 ·E—mail：y码uo@163．com 780 分析化学 第35卷 150 mm，5斗m，美国Agilent公司)；650—10S型荧光分光光度计(日本日立公司)。 基甲酰胺(DMF)等均为分析纯，纯水由Milli—Q超纯水系统制备。