柱前衍生高效液相色谱-质谱法测定水稻中尼克烟酰胺含量.pdfVIP

第37卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报 第7期 ChineseJournalof 1037—1040 2009年7月 AnalyticalChemistry 柱前衍生高效液相色谱．质谱法测定水稻中尼克烟酰胺含量 曹赵云·牟仁祥 陈铭学‘ (中国水稻研究所农业部稻米及制品质量监督检验测试中心，杭州310006) 摘要建立了柱前衍生高效液相色谱一质谱联用(HPLC．MS)测定水稻中尼克烟酰胺含量的方法。样品中 尼克烟酰胺经水提取后，与9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC—C1)衍生，采用液相色谱质谱联用仪测定。系统研究了 衍生剂浓度和衍生介质等条件对衍生效率的影响。通过优化流动相酸度和梯度洗脱等条件，提高了方法灵敏 度。尼克烟酰胺在0．1—5．0 mg／L范围内呈良好的线性关系(r=0．9983)，对水稻的根、茎、叶及大米的标准 加入实验表明，方法的添加回收率在72．O％一89．2％之间；相对标准偏差为2．3％～9．6％；方法检出限为 0．05 mg／l‘g。方法简便、准确可靠，可以满足水稻中生理水平尼克烟酰胺的定性定量分析。 关键词尼克烟酰胺，水稻，柱前衍生，高效液相色谱，质谱 1 引 言 地上部的长距离运输中发挥重要作用，同时也是调节植物对重金属元素吸收的关键物质口J。已有研究 的抑制作用H．5J。近年来，有关Cd在土壤．食物中的迁移已成为Cd污染研究的热点∞J，而水稻是对Cd 吸收较强的谷类作物¨J。因此，对水稻中NA进行快速、准确的测定，将为探明水稻中NA在提升稻米 营养价值、降低重金属污染方面的作用提供重要的技术手段。 有关NA的测定方法，目前仅有少量报道，其主要是高效液相色谱法，测定样品也大多是NA含量 较高的烟草等植物悼卅¨。如wada等旧1采用离子交换柱分离，柱后衍生荧光法；Jean等归1采用离子交 换柱净化，柱前衍生荧光法，并采用飞行时间质谱法分别测定了烟草等植物中NA含量¨1|。本实验中， 低的问题，能满足水稻(根、茎、叶、籽粒)中生理水平尼克烟酰胺含量的测定。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 国IKA公司)；R-215旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司)。 乙腈(色谱纯，德国Merck公司)；甲酸(色谱纯，美国Tedia公司)；0．2mol／L硼酸盐缓冲液(分析 纯，pH Sigma公司)，用乙腈将FMOC—C1配成0．6g／L的衍生液；尼克烟酰胺标准品(加拿大TRC公司，纯度 99％)，用水配制成100mg／L的标准储备液，使用前再配制为所需浓度。 2．2实验方法 2．2．1样品制备本实验所用样品，均由中国水稻研究所培育。于分蘖盛期时采集水稻植株样品，用 高纯水冲洗干净，并用纱布擦去表面水分，于4℃下封存，15d内测定。于收获期采集水稻籽粒，脱壳后 糙米置于干燥器中备用。水稻植株样品：将水稻植株按根、茎、叶分割为3部分，剪碎，再研磨捣细，称取 2 r／min mL塑料离心管中，加入20mL水，在高速分散机中(10000 min后，以5000 g于50 r／min)匀浆2 2008一10．12收稿；2009-03·10接受 ·E—mail：enlin弘ue@163．eom 1038 分析化学 第37卷 离心10min，收集上清液，重复3次。合并提取液于100 mL烧瓶中，置于旋转蒸发仪上，在40℃左右浓 缩近干，用水定容至10mL后待衍生化。稻米样品：将糙米粉碎，过粒径为0．18mm(80目)筛，称取 0．5g于50mL塑料离心管中，加入10mL水，以下操作同于水稻植株样品。