栝楼蛋白Ⅱ.栝楼蛋白部分化学结构的初步测定.pdfVIP

CmMICASINICA 化学学报AOTA 1998，56，302--307 栝楼蛋白 Ⅱ．栝楼蛋白部分化学结构的初步测定 向邦平 金善炜。 曹伯巽 傅桂香 (中国科学院上海有机化学研究所上海200032) kirilowii 摘要栝楼蛋白(Trichobitacin)是从栝楼(Trichosanthes 栝楼块根，同源性比较强，所以这些肽序列在两种蛋白质中基本一样；再结合蛋白质N一端自动顺 序仪测定栝楼蛋白N一端的结果，确定了栝楼蛋白N一端38个氨基酸的顺序，栝楼蛋白经胰蛋白 谱法共确定了栝楼蛋白N一端，C一端等100多个氨基酸残基的序列． 关键词栝楼蛋白，天花粉蛋白(TCS)，核糖体失活蛋白，蛋白质结构测定，质谱 kirilowii 天花粉蛋白(Trichosanthin)是从栝楼(Trichosanthes 压榨汁中分离得到的一种核糖体失活蛋白【1|，它具有多种酶活性【2’3j．目前，它已被用于引产， 治疗葡萄胎、恶性葡萄胎和宫外孕、抗肿瘤以及在临床上治疗艾滋病¨J．由于发现它具有抗 HIV的活性以及临床上的疗效b~8J引起了有关科学工作者的关注，近年来又有从栝楼块根中 分离得到了几种有生物活性的核糖体失活蛋白的报道19,10]。 通过Sephadex G一75，CM—Sephadex 具有础妊N一糖苷酶活性和抑制人胎盘绒毛滋养层细胞生长的活性．本文将进一步报道它 的部分一级结构以及一些比较新的质谱法在这方面的应用． 质谱在蛋白质化学中的应用越来越为广泛，特别是在解析蛋白质的一级结构方面取得了 引人注目的成果，有着广阔的应用前景．本文在应用基质辅助的激光解析飞行时间质谱 assistedlaser ionization—timeof (Matrix desportion flight—mass atombombardment—mass TOF—MS)L12J和快原子轰击质谱(Fast MS)【”J等质谱技术解析蛋白质一级结构方面做了一些工作，获得了一些很有用的有关栝楼蛋 白一级结构的信息． 1 实验 -男，64岁，研究员 一 向邦平硕士论文(1996)的部分工作 CHIMICASINICA1998 化学学报ACTA 303 1．1材料 过甲苯磺酰一L一苯丙氨酸氯甲基酮(TPCK)预处理．其它试剂为分析纯或顺序纯级． 1．2仪器 MAT 8430．唧LC系Waters 810．蛋白质N一端和C一端自动顺序仪则都是ABI公司产品． 1．3方法 1．3．1 J 栝楼蛋白的胰蛋白酶酶解【14 19mg栝楼蛋白，加入0．6mL 100‘lE沸水中加热2min，加0．6mL双蒸水和0．6mL 同样条件下酶解． 1．3．2胰蛋白酶酶解栝楼蛋白后的混合肽质量的测定上述方法酶解后的溶液冷冻干燥，分 质． 1．3．3栝楼蛋白经胰蛋白酶酶解的肽段用HPLC分离 心分成清液和沉淀两部分，清液直接用HPLC反相柱(p．Bondapak 淀部分经pH 以下条件洗脱： 洗脱液：A：0．1％TFA水溶液 B：0．08％T】认的80％CH3CN水溶液 洗脱梯度：时间：0—43—50—55—58min B％：0—65—100—100—0 流速：2mL／min检测波长：230nm 双偶合法手工测序[15]，以及用质谱法比较栝楼蛋白与天花粉蛋白相同肽段从而确定相应肽的