毛细管电泳电化学发光用于丙吡胺及其与血浆蛋白结合率的测定.pdfVIP

第37卷 HUAXUE) 第1期 分析化学(FENXI 研究报告 of 53—56 2009年1月 ChineseJournal AnalyticalChemistry 毛细管电泳电化学发光用于丙吡胺及其 与血浆蛋白结合率的测定 周玲玲袁吉培 汪尔康+ (中国科学院长春应用化学研究所电分析化学国家重点实验室，长春130022) 摘要本实验利用透析袋平衡透析、毛细管电泳Ru(bpy)；+电化学发光检测技术测定了丙吡胺和人血浆 kV持续10 mmol／L磷酸盐缓 蛋白的结合率。在恒电位1．3V；进样电压lo S，分离电压15kV，运行缓冲液30 mmol／L 7．5)，检测池中为5 7．5)中等最优化的条 冲液(pH Ru(bpy)；+稀释于50mmol／L磷酸盐缓冲液(pH 件下，丙吡胺的检出限为10pmol／L(S／N=3)。对蛋白结合率的测定结果表明，人血浆中的药物浓度为 1．6～8．2 mmol／L，丙吡胺与血浆蛋白的结合是呈线性的，其线性回归方程为Y=一0．07+0．93x，线性相关系 数r为0．9999，丙吡胺与人血浆蛋白的结合率约为90．4％。 关键词毛细管电泳，电化学发光，丙吡胺，血浆蛋白结合率，平衡透析 1 引 言 毛细管电泳(capillary 新型液相分析分离技术…，自诞生以来…，在蛋白质和多肽拉J、氨基酸¨J、药物【4，51等分子的分离分析方 面显示了强大的应用前景。它具有高效、快速、分析对象广、试剂消耗少、环境友好等优点。因为CE的 eence，ECL)检测正响应了这一需求，它是化学发光和电化学过程的结合，由于其较低的背景信号而使 得被分析物的检出限低、线性范围宽【6】。电化学发光体系中采用较多的是三联吡啶钌(Ru(bpy)；+)反 物分析以及药物与蛋白结合作用的研究中¨叫0|。 用的研究有着重要的临床价值，因为游离药物的浓度会影响药物分布以及药物效应¨2|。药物蛋白结合 率是药物动力学的重要参数之一，研究药物和蛋白作用的方法主要包括平衡透析、超滤、核磁共振光 谱、质谱、色谱、毛细管电泳等方法¨3l，其中测定药物游离浓度最常使用的方法是平衡透析¨引。本实验 采用传统的平衡透析方法，利用CE—ECL技术测定了DP对人血浆蛋白的结合率。 2实验部分 2．1仪器与试剂 MPI．A型毛细管电泳电化学发光检测仪(西安瑞迈分析仪器有限公司，中科院长春应用化学研究 所)，该仪器由数控毛细管电泳高压电源、多功能化学发光分析仪、电化学分析仪三部分组成，并与计算 机联用。本实验使用了50cm长、内径为25¨m的未涂层的熔融石英毛细管(河北永年光纤厂)。CE— Pt圆盘电极作为工 ECL检测池已有报道[151。柱端ECL检测池中采用了传统的三电极体系：晒00Ixm (x40)调整为准直，其距离为125“m。 纯。透析袋(8000 2008旬5J04收稿；2008-07-01接受 本文系罔家自然科学基金(No和中国科学院(No．KJCX2。YWHll)资助课题 ·E·mail：ekwang@ciac．jJ∞ 分析化学 第37卷 毛细管电泳所有溶液均放置于4℃冰箱，并且进样前先用0．22 la,m滤膜(上海新亚净化材料厂)进