液相色谱-三重四极杆串联质谱法测定昆虫对茚虫威活化代谢活性的差异.pdfVIP

第42卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第4期 ChineseJournalof 463～468 2014年4月 AnalyticalChemistry 液相色谱．三重四极杆串联质谱法 测定昆虫对茚虫威活化代谢活性的差异 李富根1’2 艾国民3 邹东云1 季颖2 顾宝根2 高希武“ 1(中国农业大学农学与生物技术学院昆虫学系，北京100193) 2(农业部农药检定所，北京100125) 3(中国科学院微生物研究所，微生物资源前期开发国家重点实验室，北京100101) 摘要采用液相色谱-三重四极杆串联质谱，建立了测定昆虫对茚虫威活化代谢(Ⅳ-脱甲氧羰基反应，产物 为DCJW)活性的新方法。按本方法制备样品后30h内，产物DcJw的化学稳定性较好，5次重复测定的相对 标准偏差(RSD)为2．1％。本方法的检出限为0．01pg，定量限为0．1pg；DCJW纯乙腈溶液、小菜蛾酶促反应 样品连续进样、5次独立酶促反应样品分别进样，3组样品独立测定的RSD分别为0．7％，1．1％，2．7％； 3种DCJW添加水平(440，880和2200 46—2310 Pg范围内线性关系良好。本方法灵敏度高，操作方便，适用于昆虫代谢酶系对茚虫威的活化代谢活 性分析。应用本方法比较了小菜蛾阿维菌素抗性品系与敏感品系对茚虫威Ⅳ-脱甲氧羰基代谢活性差异，结 果表明，小菜蛾抗性品系对茚虫威Ⅳ-脱甲氧羰基活性是敏感品系的3．43倍，初步推断小菜蛾对杀虫剂阿维 菌素和茚虫威可能存在负交互抗性。 关键词液相色谱一三重四极杆串联质谱；茚虫威；活化代谢；小菜蛾 1 引 言 昆虫体内介导杀虫剂直接代谢的酶系主要包括细胞色素P450酶系¨J，水解酶系旧J，以及谷胱甘肽． s．转移酶系旧1等。昆虫代谢酶系催化的杀虫剂代谢具有重要的毒理学意义，主要表现为解毒代谢与活 化代谢，或表现为解毒代谢与活化代谢的某种平衡，其代谢活性高低直接影响着杀虫剂在昆虫体内的存 在形式、作用机制、生物活性和抗药性水平等Hj。在昆虫毒理学研究中，特别是在杀虫剂抗药性生化机 制研究中，为了表征昆虫酶系的代谢活性在杀虫剂代谢抗性机制中的作用，常利用经典的光谱方法(紫 外可见光度法或荧光光度法)测定昆虫对多种模式底物或杀虫剂类似物的代谢活性来表示¨J。近年 来，建立了一些相应的色谱或色谱．质谱联用分析方法M卅J。然而，利用色谱及色谱一质谱联用技术表征 昆虫对杀虫剂直接代谢活性的报道却很少¨J。因为应用模式底物(无论一种还是多种底物)表征昆虫 对杀虫剂的代谢活性是间接的，而测定昆虫对杀虫剂本身的代谢活性则更有说服力¨J，所以开发合适 的分析方法，直接测定昆虫对杀虫剂的代谢能力，将在昆虫毒理学研究中有广泛的应用。 害虫都有防效，其作用机理是茚虫威在鳞翅目昆虫的脂肪体，特别是中肠内活化代谢为Ⅳ-脱甲氧羰基 代谢产物(N-decarbomethoxyllated 0，11 丧失功能而导致害虫死亡L1 J。目前，尚无测定昆虫对茚虫威活化代谢活性方法的报道。本实验建立 了高效液相色谱．三重四极杆串联质谱联用的多反应监测(MRM)分析方法，用于准确测定昆虫对茚虫 0’11|。本方法选用棉铃虫中肠作为酶液，进行MRM分析参数优化，分析 威的水解活化代谢活性(图1)u 方法的建立及确认是通过小菜蛾酶液的代谢反应进行的。MRM分析中，以m／z267．0为定量离子， 2013-09-24收稿；2013．11-25接受 本文系国家重点基础研究发展计划项目(973计划)(No．201203038)资助 }E—mail：gaoxiwu@263．net．cn 分析化学 第42卷 m／z207．0，150．0为定性离子，通过定量分析产物DCJW的生成量，表征茚虫威的水解活化代谢活性， 用于分析小菜蛾阿维菌素抗性品系与敏感品系对茚虫