液相色谱-串联质谱法测定牛奶中5种多肤类抗生素.pdfVIP

第39卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第5期 2011年5月 ChineseJournalof 652～657 AnalyticalChemistry DOI：10．3724／SP．J．1096．2011．00652 液相色谱一串联质谱法测定牛奶中5种多肽类抗生素 刘佳佳 金芬 余永新 刘洪斌 史晓梅 王淼 王静’ 徐思远 (中国农业科学院农产品质量与食物安全重点实验摩。中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所。北京100081) 摘 要 建立了牛奶中杆菌肽、粘杆菌素A、粘杆菌素B、维吉^三霉素和万占霉素5种多肽类抗生素的反相液 相色谱一串联质谱(HPLC—MS／MS)检测方法。牛奶样品经甲醇一0．1％甲酸水提取后。用40／o一氯乙酸乙腈除蛋 白，液一液萃取后．采用O．1％甲胲(A)和O．1％甲酸乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱．质谱(ESI+)采用多离子 检测模式(MRM)对两价态或i价态的定性和定蕾离子进行监测。结果表明，5种多肽类抗生索在25，50和 100 pg／kg的添加水平的fⅡJ收率为75．1％～120．1％；相对标准偏差小于15．7％；方法检出限为O．2～5．6pg／kg。 本方法前处理操作快速简单，重复性好，满足对牛奶中多肽类抗牛素的快速、准确的检测要求，适合大鲢样品 的准确定性和定量分析。 关键词 液相色谱一串联质谱；牛奶；多肽；残留 l 引 言 多肽类抗牛素是rfl不同类型的氨基酸缩合而成的小分子肽类，主要用于促进动物生长及治疗畜禽 疾病。目前。多肽类抗生素被广泛用于家禽、猪、牛等饲料添加剂和兽药I卜31。常用的多肽类抗生素包括 粘杆菌素、杆菌肽、维吉尼霉素及万古霉素等f4．5I。然而，随着多肽类抗生素的广泛使用，滥用及不遵守 休药期等现象时有发生。药物将可能通过食物链的传递进入人体，危害人体健康。如果长期暴露，还会 增加细菌的抗药性16】，具有潜在的健康风险和牛态风险。 多肽类抗卡素可分别抗革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、绿脓杆菌、真菌、病毒、螺旋体、原虫的感染， 特别是对牛乳腺炎等疾病有较好的疗效。目前，欧盟、日本、美同、澳大利亚等均已制定牛奶巾多种多肽 类抗生素的限餐。其中，欧盟对杆菌肽A及粘杆菌素的限髓分别为100和50 p．g／kg；日本对杆荫肽A、 维吉尼霉素、万古霉素、粘杆菌素的限量分别为400，100，IO和10 pg／kg。而我闰也于近年制定了牛奶中 杆菌肽A及枯杆菌素的限量。分别为500和50 p．g／kg。关于多肽类抗牛素的检测方法逐渐引起了关注。 目前，多肽类抗生素检测方法包括微生物法、免疫分析法p1、高效液相色谱法(HPLC)1s．91、毛细管电 泳法¨0I等，但这些方法均存在灵敏度低等问题。无法满足粘杆菌素的50 Bg／kg的检出限要求。有关同时 检测这5种多肽的研究尚未见报道。近年来。HPLC—MS／MS检测方法在痕肇分析中的应用广泛。已有用 HPLC—MS／MSf3^”1检测多肽的报道。但该方法前处理方法复杂．检出限仍无法满足现有国际限量的要 求。本实验采用快速前处理步骤。同时检测牛奶中5种多肽类抗生素，方法简单、实用。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 Sunfine 平(瑞士MettlerToledo公司)；高速冷冻离心机(美同Thermo公司)；WatersC18色谱柱 (50mm×2．1l l mrn,5p．m