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临床微生物学检验实验二 药敏试验（K-B法、肉汤稀释法） 一、药 敏 试 验 1、K-B法 实验材料： MH培养基、无菌棉棒、无菌生理盐水 菌种（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌） 抗菌药物纸片　（-4℃保存备用） 麦氏比浊管一套 实验方法： （1）待检菌液 6×108 CFU／ml（自配） （2）操作 待检菌液 MH琼脂表面 贴含药纸片 无菌棉签 涂布 室温5min 35℃ 16～18h 观察结果 操作注意事项： 菌液应在15分钟内接种完毕 注意纸片距离 ＞24mm ＞15mm （3）结果　 测量抑菌圈直径 20mm 表1 常用药敏试验纸片判断标准与其相应的MIC近似值 抗菌药物 纸片 抑菌圈直径(毫米) 最低抑菌浓度(μg/ml) 含药量 耐药 中度敏感 敏感 耐药 敏感 青霉素 10单位 ≤11 12～21 ≥22 ≥32 ≤1.5 链霉素 10μg ≤11 12～14 ≥15 ≥15 ≤6 氯霉素 30μg ≤12 13～17 ≥18 ≥25 ≤12.5 红霉素 15μg ≤13 14～17 ≥18 ≥8 ≤2 庆大霉素 10μg ≤12 13～14 ≥15 ≥8 ≤4 卡那霉素 30μg ≤13 14～17 ≥18 ≥25 ≤6 四环素 30μg ≤14 15～18 ≥19 ≥12 ≤4 多粘菌素B 300单位 ≤8 9～11 ≥12 ≥ 50单位 磺胺 300μg ≤12 13～16 ≥17 ≥350 ≤100 甲氧苯青霉素 5μg ≤9 10～13 ≥14 — ≤3 奈啶酸 30μg ≤13 14～18 ≥19 ≥32 ≤12 2、肉汤稀释法 实验材料： MH肉汤25支/组、无菌生理盐水等 （上次课已备） 头孢唑啉0.5g/支 菌种（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌） 麦氏比浊管一套 实验方法： （1）配制菌液 6×108 CFU／ml （2）配制药液 头孢唑啉0.5g/支＋5ml生理盐水 105ug/ml 1:5稀释 2×104ug/ml药液 （3）连续稀释药液、加菌液 1 2 3 4 ……. 21 22 23 24 25 M-H肉汤(ml) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 药液(ml) 2 2 2 2 2 2 2 2 － － 菌液(ml) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 － 0.2 药物浓度（ug/ml) 104 5×103 2.5×103 …………………………………………………… 空白对照 菌对照 35℃孵育16~18h，观察结果 弃去 （4）结果观察 以完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC 左起第四管为药物最低浓度而肉眼无细菌生长，即待测菌的MIC 二、水等样品中细菌计数（倾注平板法） 实验材料： 样品：自来水、校园湖水、水池积水、 消毒奶、灭菌奶等（学生自带） 普通琼脂培养基（上节准备） 无菌烧瓶、试管、10ml,1ml吸管(上节准备） 每毫升样品中菌量（cfu） ＝ 每皿菌落平均数 × 1/取样体积数 × 稀释倍数 实验方法：