IBDVVP2基因重组质粒pBV220表达条件优化.pdf

动物医学进展 ,2007 ,28 (4) :913 Pro gre ss in Vet erinary Medicine IBDV V P2 基因重组质粒 pBV 220 表达条件的优化 1 2 1 1 1 1 程太平 ,荣 　俊 ,刘晓娜 ,邹浩勇 ,齐晓亮 ,樊友净 ( 1. 长江大学动物科学学院 ,湖北荆州 434025 ;2 . 长江大学生命科学学院 ,湖北荆州 434025) 　　摘 　要 :采用三角瓶小量法振荡培养 ,对含传染性法氏囊病病毒 V P2 基因的重组质粒 pBV220 在大肠 ( ) 埃希菌 BL 2 1 内表达条件进行优化 。在 37 ℃时诱导 ,对起始 OD600 值 0 . 40 ±0 . 025～0 . 65 ±0 . 025 进行筛 ( ) 选 ;在 42 ℃时诱导 ,对起始 OD600 值 0 . 40 ±0 . 025～0 . 65 ±0 . 025 进行筛选 ;在 37 ℃和 42 ℃时诱导 ,分别 ( ) ( ) 对诱导时间 5 、6 、7 、8 h 及待选培养基 R 1 、R2 、R3 进行筛选 。以菌体湿重和菌体 V P2 蛋白表达水平两个 指标进行统计分析及综合评价 。结果表明 ,37 ℃时诱导 ,最适宜起始 OD600 为 0 . 45 ±0 . 025 ,最佳诱导时间 为 7 h ,最佳培养基是 R 1 ;42 ℃时诱导 ,最适宜起始 OD600 为 0 . 40 ±0 . 025 ,最佳诱导时间为 5 h ,最佳培养基 是 R2 。42 ℃时的每一诱导时间组菌体湿重和 V P2 表达水平都显著低于 37 ℃时 。因此 , 以重组质粒 pBV220 的大肠埃希菌 BL 2 1 表达 IBDV V P2 基因 ,在 37 ℃时诱导表达要比42 ℃时好 。 　　关键词 :传染性法氏囊病病毒 ;pBV220 ;表达优化 ;大肠埃希菌 BL 2 1 ( ) 中图分类号 :S852 . 659 . 4 文献标识码 :A 文章编号 2007 　　以重组原核表达质粒在大肠埃希菌表达一些外 组质粒导入工程菌大肠埃希菌 BL 2 1 制得转化菌 , 源基因 ,常常得到含 目的蛋白的包涵体 ,需要进行变 由本课题组完成和保存 。IBDV 琼脂免疫扩散试验 性复性处理 ,还可能发生分子结构的改变 ,也不能表 诊断抗原和标准阳性血清 ,购 自中国兽医药品监察 达糖蛋白。但也有报道 , 以某些重组原核表达质粒 所 。 在大肠埃希菌表达一些外源基因 ,得到可溶的、不需 1. 2 　试剂和培养基 变性复性处理 的、具有生物学活性 的 目的蛋 白。 N aO H , K