第六章 利用Red重组系统敲除大肠杆菌rnc基因构建dsRNA原核表达体系.pdf

( ) ( ) 山东农业大学学报 自然科学版 , 2009 , 40 3 : 46 1 - 464 Journal of Shandong A gricu ltural U n iversity (N atu ral Science) 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 利用 Red重组系统敲除大肠杆菌 rnc基因 构建 dsRNA 原核表达体系 1 2 2 3 3 3 尹国华 ,刘 　楠 , 孙兆楠 , 宋云枝 , 朱常香 , 温孚江 ( 1. 山东农业大学植物保护学院 , 山东 泰安 　27 10 18; 2. 山东农业大学生命科学学院 , 山东 泰安 　27 10 18; 3. 山东农业大学作物生物学国家重点实验室 , 山东 泰安 　27 10 18) λ 摘要 :大肠杆菌的 rnc基因编码产物为 RN ase III酶 , RN a se III酶能降解细菌中绝大多数 d sRNA 。利用来源于 噬 ( ) 菌体的 R ed重组系统和重叠延伸 PCR 技术 gene sp licing by overlap exten sion PCR , SOE - PCR ,敲除了大肠杆菌 ( ) origam i D E3 菌株的 rnc基因 ,获得了 RN ase III缺失型菌株 M - origam i。利用电激法 ,将构建的 TMV 运动蛋白 ( ) 基因 movem en t p rotein gene,M P 的 d sRNA 表达载体 LM P480导入 M - origam i菌株中 , IPTG诱导表达的结果显 示 :构建的 M - origam i/LM P480 原核表达系统能高效表达 TMV 运动蛋白基因的 d sRNA 。初步的抗病性鉴定显 示 ,表达的 d sRNA 能够诱发烟草对 TMV 的抗性 。 关键词 : R ed重组系统 ;重叠延伸 PCR; RN a se III缺失菌株 ; d sRNA ;病毒抗性 中图分类号 : S 432. 1　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 1000 - 2324 (2009) 03 - 03 17 - 08 KNOCK - O UT THE RN C GENE O F E COL I US ING RED - M ED IA TED RECOM B INA T IO N FO R CO NSTRUCT IO N O F D SRNA PRO KA RYO T IC EXPRESS IO N SY STEM 1 2 2 3 3 3 YIN Guo - hua , L IU N an , SUN