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第35卷 分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告 第12期 2007年12月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1767—1771 六昧地黄丸组分的二维液相色谱分离 唐涛 。 张维冰 李彤 王风云。 (大连依利特分析仪器有限公司，大连116023) (华东理工大学，上海200237) (南京理工大学工业化学研究所，南京210094) (中国科学院大连化学物理研究所，大连 1 16023) 摘 要 以1个常规六通阀直接连接两支常规尺寸的色谱柱(250 mm×4．6 mm i．d．)，构建简单的SCX／RP 在线二维液相色谱系统，对中成药六味地黄丸组分进行了优化分离。样品经过第一维阳离子交换色谱 (Hypersil SCX)，洗脱产物分离后通过六通阀直接富集到反相分析柱(C。 )顶端，被转移到第二维色谱柱上继 续进行分离。经过11步不连续的线性梯度洗脱，二维分离系统出峰数量达到550多个，峰容量达到2266。构 建的二维液相色谱系统结构简单，与一维色谱相比，具有分辨率高、峰容量大的特点。 关键词 二维液相色谱，六味地黄丸，峰容量 1 引 言 六味地黄丸是最常用的中成药之一，成分复杂。刘传华等¨ 采用HPLC方法对其中的没食子酸、 熊果酸、丹皮酚等组分进行了定性及定量分析。赵新峰等 利用二级质谱对其中的9种成分进行标记。 由于中成药的药效往往是多种成分相互作用的结果，发展一种便于同时测定多种成分的分离方法，对研 究中成药的有效成分具有重要意义。 自1984年Giddings等 ．5 提出多维分离的概念以来，二维液相色谱以其高分辨率、高峰容量的特 点，在蛋白组学 ’ 等领域得到成功应用，在中成药有效成分研究方面也表现出明显优势。在前期工作 中 ，采用十通阀结合捕集柱作切换接口构建了多种二维液相分离系统，并应用于蛋白质组学和中 药研究。本研究采用常规液相色谱仪，以1个六通阀作接口构建了简单的强阳离子交换／反相(SCX／ RP)在线二维液相色谱系统，对六味地黄丸组分进行分离，获得了较好的结果。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 P230高压梯度液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司)，包括P230高压恒流泵、DAD230 二 极管阵列检测器、EC2000色谱数据处理工作站、DG230-4在线脱气机等；EV750．100六通阀(Rheodyne 公司)；Model C3860A超声仪(CBL Photo．electron Technology Co．Lid．)；METrLER TOLEDO pH计(梅特 勒．托利多公司)；离子交换色谱柱采用Hypersil SCX(250 mm×4．6 mm i．d．，5 m，大连依利特分析仪 器有限公司)，反相色谱柱采用自装c。8柱(250 mm×4．6 mm i．d．，5 m)。 乙腈(色谱纯，Tedia)；NaC1、甲酸、Na：HPO 、H PO (分析纯，天津市科密欧化学试剂开发中心)；六 味地黄丸购自北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂。实验用水由Millipore纯水系统(美国Milli． pore公司)制备，流动相配制后经0．45 m水系微孔滤膜过滤。 2．2 样品预处理 称取六味地黄丸丸剂5．0 g，粉碎，加硅藻土研磨成粉。将粉末置于圆底烧瓶中，加入100 mL无水 乙醇，索氏提取2 h。减压回流，将所得物质转移至10 mL容量瓶中，用甲醇定容。经0．45 m微孔滤 膜过滤后备用。 2007-03-07收稿；2007-09-04接受 本文系国家自然科学基金(No、国家重点基础研究发展规划(973)项目(No．001CB510202)和“十一五”国家科技支撑项目 资助 E—mail：weibingzhang@dicp．ac．cn 分析化学 第35卷 2．3 色谱条件 第一维强阳离子交换色谱柱采用Hypersil SCX分离柱；流动相pH=2．5，A为含0．1％甲酸的水溶