农杆菌介导的玉米大斑病菌的遗传转化.pdfVIP

植物病理学报 ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA 37(6)：675-678(2007) 农杆菌介导的玉米大斑病菌的遗传转化 刘建光 ，王艳辉 ，张国珍 ，贾 慧 ，董金皋 ( 河北农业大学生命科学学院，保定071001；。中国农业大学植物病理学系，北京 100094) Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of Setosphaeria turcica LIU Jian—guang ，WANG Yan—hui ，ZHAN G Guo．zhen。 JIA Hui ，DONG Jin-gao ( College of Life ， Sciences，Agricultural University of Hebei，Baoding 071001，China； Department of Plant Pathology，China Agficulmr~Uni— versity，Beijing 100094，China) Abstract：Agrobacterium tumefaciens—mediated transformation(ATMT)is a useful method in genetic tranS- form ation of a wide range from plant species，yeasts，fungi to human cells．In this paper，the Setosphaeria turcica had been successfully transform ed by using the ATMT system with an efficiency at 40——60 transfor·· mants per 10 spores．PCR and Southern blot analysis of the transform ants showed that the T—DNA had been integrated into genome of the fungus by single copy at random sites．ATMT of S．turcica provides an opportu— nity for advancing studies of the molecular genetics of the fungus and the molecular mechanism of its pathoge— nicity to maize． Key words：Setosphaeria turcica；T—DNA；Agrobacterium tumefaciens—mediated transformation 文章编号：0412-0914(2007)06-0675-04 玉米大斑病是玉米生产上的一种重要真菌病 1 材料与方法 害，在世界主要玉米产区都曾造成过严重的经济损 失。目前，有关该病原菌的生理分化、遗传变异及 1．1 供试材料 毒素产生等方面研究报道较多，而在玉米与大斑病 供试菌株：玉米大斑病菌菌株01-23由河北农 菌互作的分子机理方面研究相对较少。农杆菌介 业大学真菌毒素实验室保存。 导(Agrobacterium tumefaciens-mediated transforma- 供试农杆菌菌株：AGL．1，构建的T—DNA双元载 tion，ATMT)的真菌遗传转化是研究真菌与其宿 体为pBHtl l2 J，由福建农林大学王宗华教授惠赠。 主互作的有力工具，它不仅具有效率高、操作方便 供试试剂：潮霉素B(Hygromycin B)为德国 等优点，而且遗传稳定、拷贝数低、重复性好，克服 Roche公司生产，头孢噻肟钠(Cefotaxime)为石家 庄中诺药业集团生产，羧苄青霉素(Ca