渔用微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件研究.pdfVIP

哥渔业 2007／g~I 24卷第12期 Shandong Fisheries 2007，24(1 2) 国国趿绝囝豳躅勋 驾囤国岛吗园目器目 同盘 王友政 杨桂文 丛 潇 安利国 (山东师范大学生命科学学院动物抗性重点实验室，济南 250014) 摘要 本实验以筛选出能用于养殖水体净化的菌株为目的，通过稀释涂板法和划线法，从河道污泥、花园土壤、鲈肠道 内分离筛选到6株产絮凝剂的细菌，经过复筛得到1株高效絮凝剂产生菌DK一1。 关键词 絮凝剂产生菌 微生物絮凝剂 絮凝活性 培养条件 近20年来，水产养殖在我国得到了迅猛发展，但养 蒸馏水1 000 ml。 殖生产模式基本上仍沿袭以往的静水、不排污的池塘养 鱼汤培养基(鱼肠道内分离培养基)蛋白胨10 g／L， 殖为主，养殖水体污染日益严重，需要大量的絮凝剂对 NaC1 5 g，L，K2HPO4·3H20 2．8 WE，酵母浸膏10 g／L，15％ 其进行处理，而目前的污水处理中，实际使用的絮凝剂 鱼肉汤1 000ml(15 g-- 肉加水1 000ml煮沸1小时，然 以无机的聚合氯化铝和有机合成的聚丙烯酰胺最为广泛。 后加水至1 000 ml，纱布过滤浸出肉汤)，调节pH7．2～ 目前，国内外通过对生物絮凝剂的大量研究，已筛选出 7．4灭菌(121 oC，20分钟)。 几十种具有絮凝活性的微生物。本实验以筛选出能用于 发酵培养基：同种子培养基。 养殖水体净化的菌株为目的，主要从河道污泥、花园土 1．2筛选方法 壤和鲈肠道中分离和筛选产絮凝细菌，并对其产絮凝剂 1．2．1目的菌株的分离筛选 采用稀释涂布、划线的方法 的最佳培养条件进行了研究并对絮凝成分进行了初步探 在平板上分离细菌单菌株，接种过的平板倒置于37~C生 讨。 化培养箱中培养过夜，挑取单克隆菌落于发酵培养基中 1材料与方法 进行液体培养，培养条件为：装液量100 ml／250 ml三角 1．1菌种的来源及培养基 瓶，接种量为4％，培养温度37~C，摇床转数160 rpm， 菌种来源：济南市小清河河道污泥、山东师范大学 培养时间72dx时，初筛有絮凝活性的细菌。测定通过初 花园土壤、鲈肠道。 筛的发酵液絮凝活性，以絮凝率的高低为复筛指标。将 分离培养基：葡萄糖20 g／L，尿素0．5 g／L，酵母膏 复筛得到絮凝活性较高的目的菌株用斜面或15％甘油进 O．5 L，K2HPO4 5 g／L，KH2PO42 g／L，NaC1 0．1 g／L， 行保存。 fNH4)28040．2 g／L，尿素0．5 g／L，琼脂15～20 g，蒸溜水 1．2．2絮凝活性的测定方法 初筛方法：在试管中加入 1 000ml，pH7．0～7．2，灭菌(115 oC，30分钟)。 10ml高岭土悬浊液(5g／L)，1 ml质量分数为1％的CaC12 高氏一号可溶性淀粉20 g／L，KNO3 1 g，L，NaC1 0．5 和1 ml发酵液，震荡静置10分钟，肉眼观察有无大颗粒 g／L，K2HPO4 3H20 0．5 L，Mgs04‘7H20 0．5 g，L，FeSO4‘ 沉淀产生，产生大颗粒者进行复筛。 7H20 0．01 g／L，琼脂15～20 g／L，水1 000 ml，pH7．4～ 复筛方法：在200ml烧杯中加入98ml高岭土悬浊 7．6。 液(5 g／L)，3 ml质量分数为1％的CaC12和2ml发酵液， 察氏培养基NaNO3 2 g／L，KC1 5 g／L，K2HPO4·3H20 调pH值