百脉根结瘤因子受体NFR5及其相互作用蛋白的研究.pdfVIP

2007年12月 中国油料作物学报 2007，29(4)：372— 376 Chinese journal of oil crop sciences 百脉根结瘤因子受体NFR5及 其相互作用蛋白的研究 陈春芬，朱 辉，杨 绮，朱 浩，张忠明 (华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，湖北武汉43OO7O) 摘要：以豆科植物百脉根的mRNA为模板，利用RT—PCR方法，扩增到1．Okb结瘤因子受体5(nod factor receptor NFR5)蛋白激酶结构域的DNA片段(nfr5-pk)，并将该片段克隆到酵母双杂交BD载体pGBKT7上。通过 酵母双杂交技术，筛选接种根瘤菌的百脉根AD-cDNA酵母双杂交文库，从文库中分离到与， 5一 相互作用的221 个阳性克隆。从这些阳性克隆酵母中分离AD质粒经反复验证，对26个确定阳性克隆的外源片段进行测序和同源 性分析。通过NCBI数据库比对分析鉴定出小G蛋白Rop6等6个与NFR5一PK相互作用的不同蛋白，为进一步研究 NFR5基因的功能和调控机制提供了材料。 关键词：酵母双杂交；NFR5；小G蛋白Rop6 百脉根 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1007—9084(2007)O4一O372一O5 Proteins interacted with NFR5 involved in nodulation signaling transduction in Lotus japonicus CHEN Chun—fen，ZHU Hui，YANG Qi，ZHU Hao，ZHANG Zhong—ming (State Key Laboratory of Agricultural Microbiology， Huazhong Agriculture University，Wuhan 430070，China) Abstract：NFR5 is involved in signal perception and transduction of Nod factor produced by rhizobia in Lotus japonicus．In this research，by using yeast two hybrid approach，AD—cDNA library of L．japonicus was constructed and 221 positive clones were idendified by using the protein kinase domain of NFR5( 5一 pk)as a bait at pre—screening．After retranformed and X—Gal assay，26 positive clones were confirmed．Six kinds of proteins including small G—Protein Rop6 were obtained after sequencing and blast search．These proteins proposed to be participated in function regulation NFR5． Key words：Yeast two—hybrid system；NFR5；Small G—protein Rop 6；Lotus japonicus 根瘤菌能侵染豆科植物形成根瘤，根瘤中的细 根瘤菌结瘤因子受体蛋白基因，即结瘤因子受体5 菌具有将大气中游离态氮转化成可被植物直接利用 (nod factor receptor，NFR5)和结瘤因子受体 1 的氨，即共生固氮作用。共生固氮作用包含结瘤和固 (NFR1)。两个基因分另0突变都会导致不结瘤植株 氮两个生物学过程，首先是结瘤(形成共生体)，根瘤 的产生，说明二者共同参与识别和接受结