睾丸支持细胞和全反式视黄酸诱导骨髓干细胞向精原细胞分化的研究.pdfVIP

江西医学院学报2007年第47卷第6期 Acta Academiae Medicinae Jiangxi 2007 ! Z! ‘45‘ 睾丸支持细胞和全反式视黄酸 诱导骨髓干细胞向精原细胞分化的研究 米美玲h，周 玲 ，邹 挺h，杨 蓓h，秦海燕h，王晶磊h，熊明悌h徐斯凡。，万秋华“’ (1．南昌大学医学院a．生理教研室，b．实验教学部；2．南昌市卫生学校生化教研组，南昌330006； 3．中央民族大学生命与环境科学学院中国少数民族传统医学研究中心，北京100081) 摘要：目的 探讨睾丸支持细胞(sertoli cells，SCs)和全反式视黄酸(all—trans retinoic acid，ATRA)对骨髓干细胞 (bone marrow stem cells，BMSCs)向精原细胞分化的影响。方法 常规分离12～16 d雄性SD子鼠SCs和 2月龄 雄性SD大鼠BMSCs，用MTT法检测SCs、BMSCs的存活及增殖情况，采用transwell insert双室培养观察SCs、 ATRA对 BMSCs向精原细胞方向分化的影响，并用RT—PCR检测精原细胞特异表达基因stra8 mRNA的表达情 况，用免疫组化S-P法检测c—Kit的表达情况。结果 分离后所获取的SCs FasL免疫组织化学染色结果显示，阳性 细胞数平均为(93．2±1．0) ；SCs体外培养结果显示，48 h增殖达高峰，并维持在该水平至168 h。BMSCs体外培 养结果显示，144 h时增殖达到高峰，并维持在该水平至 168 h。ATRA组、共培养组、ATRA+共培养组 BMSCs都 能表达转分化为雄性生殖细胞的分子标志stra8和c—Kit，而对照组不表达。结论 SCs可以通过释放可溶性因子 促进间接共培养的BMSCs向精原细胞方向分化，ATRA可以促进培养的BMSCs向精原细胞方向分化。 关键词：皋丸支持细胞；全反式视黄酸；骨髓干细胞；精原细胞 中图分类号：R339．2 1；Q254 文献标识码：A 文章编号：1000—2294(2007)06—0045—04 骨髓干细胞(BMSCs)是一类具有多向分化潜 1．2 实验动物 能的多能成体干细胞，它有比较好的可塑性_1]，在特 12～16 d健康SD雄性子鼠，体质量15～19 g； 定条件下能向多种细胞分化。而睾丸支持细胞 2月龄健康成年SD雄性大鼠，体质量80～100 g。 (SCs)一方面具有抑制免疫反应的功能_2 ；另一方 由南昌大学医学院动物科学部提供。 面SCs能够分泌多种物质 ]，从而促进细胞的生 1．3 方法 长、增殖和分化。本研究使用c—Kit和精原细胞特 SCs的分离与培养：取12～16 d健康SD雄性 异表达基因stra8作为指标，观察SCs和ATRA对 子鼠6只，按文献E4]的方法制备SCs。SCs分别于 BMSCs的诱导分化情况。 培养0、24、48、72、96、12O、144、168 h检测吸光值， 用MTT法绘制生长曲线。用免疫组织化学S—P法 l 材料和方法 观察FasL的表达情况，并通过FasL的表达情况检 1．1 主要试剂及仪器 测SCs的纯度。 噻唑兰(MTT，美国Sigma公司)，Percol1分离 BMSCs分离与培养：取2月龄健康成年SD雄 液(美国Pharmacia公司，批号：301944)，全反式视 性大鼠1只，按文献E4]的方法制备BMSCs，取第二 黄酸(ATRA，美国Sigma公司)，RT—PCR试剂盒 代BMSCs分别于培养0、24、48、72、96、120、144、 (美国Pharmacia公司，批号，V型胶原 168 h检测吸光值，用MTT法绘制生长曲线。 酶(美国Sigma公司