实验一高压蒸汽灭菌锅的使用和.DOC

实验一 高压蒸汽灭菌锅的使用和 玻璃器皿的洗涤、包扎及灭菌 一、实验要求： 1、熟悉微生物实验所需的各种常用器皿名称和规格。2、掌握对各种器皿清洗方法。3、掌握玻璃器皿的干热灭菌操作过程 常用各种玻璃器皿。清洗工具和去污粉、肥皂、洗涤液。电热干燥箱。任何洗涤方法，都不应对玻璃器皿有所损伤，所以不能用有腐蚀作用的化学药剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿。一般新的玻璃器皿用2%的盐酸溶液浸泡数小时，用水充洗干净。3、用过的器皿应立即洗涤，有时放置太久会增加洗涤困难。4、难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起。有油的器皿不要与无油的器皿放在一起，否则使本来无油的器皿也沾上了油垢，浪费药剂和时间。5、强酸、强碱、琼脂等腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须倒在废缸内。6、含有琼脂培养基的器皿，可先用小刀或铁丝将器皿中的琼脂培养基刮去，或把它们用水蒸煮，待琼脂融化后趁热倒出，然后用水洗涤。一般的器皿都可用去污粉、肥皂或配成5%热肥皂水来清洗油质很重的器皿，应先将油层擦去。8、如果器皿沾有煤膏、焦油及树脂类的一些物质，可用浓硫酸或40%的氢氧化钠液洗，或用洗涤液浸泡。9、当器皿上沾有蜡或油漆等物质，用加热方法使之融化揩去，或用有机溶剂（苯、二甲苯、丙酮、松节油等）拭揩。10、洗涤后的器皿达到玻璃能被水均匀湿润而无条纹和水珠。11、载玻片或盖玻片可先在2%盐酸溶液中浸1小时，然后在水中冲洗2~3次，最后用蒸馏水洗2~3次，洗后烘干冷却或浸于95%酒精中保存备用。5%肥皂水中煮10分钟后，立即用清水冲洗，以后放在洗涤液（稀释）中浸泡2小时，再用清水洗至无色为止，最后用蒸馏水洗数次，干后浸于95%酒精中保存备用。12、凡遇有传染性材料的器皿，洗涤前应经高压灭菌后清洗。养皿 10套迭在一起，用牢固的纸卷成一筒，外面用绳子捆扎，以免散开，然后进行灭菌。到使用时在无菌室中才打开取出培养皿。吸管 4~5厘米，以45°左右的角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，吸管的另一端用剩余纸条迭打结，不使散开，标上容量。若干支吸管扎成一束，灭菌后，同样要在使用时才从吸管中间拧断纸条抽去吸管（图见下页）。试管和三角瓶 2/3塞进管口（见下页图）。 合格的棉塞 不合格的棉塞 （三）灭菌 使玻璃器皿达到无菌状态叫灭菌，玻璃器皿主要用电热干燥箱进行灭菌。 1、燥箱灭菌的物品放在箱内，堆置时要留空隙勿使接触四壁，关闭箱门。2、接通电源，把箱顶的通气口适当打开，使箱内湿空气能逸出，至箱内温度达到100℃时关闭。3、调节温度控制器旋扭，直至箱内温度达到所需温度为止，观察温度是否衡定，若温度不够再行调节，调节完毕后不可再拨动调节旋扭和通气口，保持140~160℃ 2~3小时。4、切断电源，冷却到60℃时，才能把箱门打开，取出灭菌物品。5、将温度调节控制旋扭返回原处，并将箱顶通气口打开所有空箱，干净的玻璃器皿及其它耐热器皿等一般都可用此法灭菌。如培养基和其它不耐热的橡皮塞等不可用此法灭菌。高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌器装置严密，输入蒸汽不外逸，温度随蒸汽压力增高而升高，当压力增至103－206kPa时，湿度可达121.3-132℃。高压蒸汽灭菌法就是利用高压和高热释放的潜热进行灭菌，为目前可靠而有效的灭菌方法。适用于耐高温、高压，不怕潮湿的物品，如敷料、手术器械、药品、细菌培养基等。 　　潜热是指当lg100℃的水蒸汽变成lg100℃水时，释放出2255.2J的热量。 　　高压蒸汽灭菌的关键问题是为热的传导提供良好条件，而其中最重要的是使冷空气从灭菌器中顺利排出。因为冷空气导热性差，阻碍蒸汽接触欲灭菌物品，并且还可减低蒸汽分压使之不能达到应有的温度。 图5－1　手提式高压蒸汽灭菌器 　　手提式高压蒸汽灭菌器（图5－1）：为金属圆筒，分为二层，隔层内盛水，有盖，可以旋紧，加热后产生蒸汽。锅外有压力表，当蒸汽压力升高时，温度也随之相应升高。该灭菌器体积小，可自发蒸汽，便于携带。 　　操作方法如下：在灭菌器中盛水3000ml；将拟灭菌的物品随同盛装的桶放入灭菌器内；将盖子上的排气软管插于铝桶内壁的的方管中；盖好盖子，拧紧元宝螺丝，勿使漏气；锅下加热，打开排气活门，放出冷空气（一般在水沸后排气10－15分钟左右），关闭放气活门，使压力逐渐上升至103kPa，温度达121.3℃,维持20分钟后，排气至“0”时，慢慢打开盖子。如果突然开盖，冷空气大量进入，蒸汽凝成水滴，使物品潮湿，且玻璃类易发生爆裂。 　　卧式高压蒸汽灭菌器（图5－2）；其结构原理同手提式高压蒸汽灭菌器，因其体积大，一次可灭菌大量物品。操作人员须经专业培训，合格后方能上岗。 图5－2　卧式高压蒸汽灭菌器 　　后再关闭放气开关，待夹层压力表达到灭菌所需压力时