月季花药培养(公开课).ppt

课题2 月季的花药培养 花中皇后月季又称“月月红”，自然花期5至11月，开花连续不断 ，通常扦插就可以成活。 知识回顾 单倍体育种的过程？ 花药离体培养（N） 单倍体植株（N） 秋水仙素处理，使染色体翻倍 植株（2N） 特点：1 明显缩短育种年限 2 后代植株都为纯合子。 正常植株（2N） 花的结构 花托 花萼 花瓣 雄蕊 花药 花丝 雌蕊 柱头 花柱 子房 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉 （一）被子植物的花粉发育 1 雄蕊 一、基础知识 2 花粉的概念:由花粉母细胞经过减数分裂形成的单倍体的生殖细胞. 花粉母细胞 （小孢子母细胞） 4个小孢子 减数分裂 小孢子四分体 1个小 孢子 花粉粒 （双核） 有丝分裂 单核 双核 花粉管细胞核 营养细胞 生殖细胞核 2个精子 小孢子母细胞 小孢子 花粉囊 花药 花粉粒（双核期） 成熟花粉 8个精子 小孢子母细胞 （ ）时期 单核（ ）期 双核期 （ ）细胞核 （ ）细胞核 （ ）细胞 （ ）细胞 （ ）个精子 （ ）分裂 （ ）分裂 单核（ ）期 （ ）分裂 减数 小孢子四分体 中 边 有丝 生殖 生殖 花粉管 营养 有丝 2 2N N N N N N N N N 4个小孢子 减数分裂 有丝分裂 4个花粉管细胞核 4个生殖细胞核 有丝分裂 8个精子 1花粉母细胞 ③ 例题1：两个精子和花粉管细胞核的基因型相同？ 1、关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是（ ） A、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的 B、被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果 C、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核期、双核期等阶段 D、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，再移到细胞中央 BD 注：花粉母细胞经减数分裂形成4个单核花粉粒，每个花粉粒的细胞核进行一次有丝分裂形成1个花粉管细胞核和1个生殖细胞核，每个生殖细胞核再进行一次有丝分裂生成2个精子。 （二）产生花粉植株的两种途径 ① ② 移栽 花药中的花粉 胚状体 脱分化 愈伤组织 花药中的花粉 脱分化 分化 丛芽 再分化 丛芽 诱导 生根 体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似 原因：培养基中的激素种类及浓度配比 部分花药通过胚状体途径形成小植株 烟草花药培养 胚状体发育途径 愈伤组织转接种到再生培养基 愈伤组织分化形成再生植株 水稻花药培养 愈伤组织发育途径 部分花药产生愈伤组织 接种在平板上的水稻花药 1、材料的选择 不同植物的诱导成功率不同. 同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有直接的影响. （一般选月季的初花期） 合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间） 2、培养基的组成（ MS培养基+不同比例的植物生长调节激素） 此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等 (三)、影响花药培养的主要因素 注意：选择最合适的花粉发育时期:单核期 ①不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎； ②不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难； ③挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，微生物少，易消毒。 实验操作 一、材料的选取 二、材料的消毒 三、接种和培养 （一）材料选取 2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。 方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色) 焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。 1、从花药看：月季的初花期 从花粉看：单核期 从花蕾看：完全未开放的 花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色） 花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色） 月季花药培养时的花粉粒最好是（ ） A、四分体时期 B、二核或三核花粉粒 C、单核期 C （二）材料的消毒 5、无菌水冲洗3～5次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态 1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒 2、无菌水清洗 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟 （质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） 　　为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 　　答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 　　为什么花瓣松动会