第四章临床酶学检验技术.PPT

酶的概念： 人卫第六版 酶（enzyme）是由活细胞合成的、对其特异底物起高效催化作用的蛋白质，是机体内催化各种代谢反应最主要的生物催化剂(biocatalyst)。 人卫第七版 生物体内的酶（enzyme）是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质和核糖核酸，前者是是机体内催化各种代谢反应最主要的催化剂。 酶促反应表示为： 底物：Subestrate：S 产物：Product：P 酶 ：Enzyme：E 酶的化学本质： 绝大多数的酶是蛋白质，称这类酶为enzyme 具有催化功能的RNA被称为核酶(ribozyme) 具有催化功能的DNA被称为脱氧核酶(deoxyribozyme) 酶的研究历史： 1926年J.B.Sumner首次从刀豆制备出脲酶结晶，证明其为蛋白质，并提出酶的本质就是蛋白质的观点 1982年T.Cech发现了第1个有催化活性的天然RNA——ribozyme（核酶），以后Altman和Pace等又陆续发现了真正的RNA催化剂 1995年，Jack W. Szostak 研究室首先报道了具有DNA连接酶活性的DNA片段，称之为脱氧核酶(deoxyribozyme) 临床酶学 高诊断灵敏度 高诊断特异性 临床酶学检验技术 酶活性测定 酶蛋白质量测定 临床酶学的历史： 1908年Wohlgemuth用尿淀粉酶（AMY）诊断急性胰腺炎 1930s，LPS、ALP、ACP开始用于临床——定时法 1950s，Karmen、La Due、Wroblewski等人建立了分光光度法，ALT、AST、CK、LD等酶活性测定应用于肝胆疾病、心脏疾病的诊断——连续监测法 1970s， 同工酶和酶蛋白质量测定 1980s，同工酶亚型 酶的特性 （一）化学本质：除核酶、脱氧核酶以外，为蛋白质 （二）高效催化性 （三）高度特异性 （四）可调节性 （五）不稳定性 绝对特异性(absolute specificity)：只能作用于特定结构的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产物 。 相对特异性(relative specificity)：作用于一类化合物或一种化学键。 立体结构特异性(stereo specificity)：作用于立体异构体中的一种。 （一）米氏方程 （二）酶促反应进程 （三）动力学参数 （四）酶偶联反应 （一）米氏方程 1913年，德国化学家Michaelis和Menten根据中间产物学说对酶促反映的动力学进行研究，推导出了表示整个反应中底物浓度和反应速度关系的著名公式，称为米氏方程。 （二）酶促反应进程 1.延滞期 是指酶促反应开始至达到最大反应速度所需要的时间 2.线性期 是指酶促反应速度保持恒定的时期，不受底物浓度的影响 3.非线性期 随着反应时间的延长，底物消耗越来越明显，酶促反应速度明显下降，偏离线性而进入非线性期 　　　　　　酶促反应进程好似100m径赛 （三）动力学参数 1.初速度(initial velocity)指在反应最初阶段底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度，用v0来表示 2.最大反应速度(maximum velocity)指当酶的结合位点与底物结合饱和时的反应速度，通常用V或Vmax来表示 3.米氏常数（Michaelis constant，Km）指酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位同底物浓度 （四）酶偶联反应 Ex：待测酶 Ea：辅助酶 Ei：指示酶 　　　酶偶联反应进程 1.预孵育期 2.延滞期 3.线性期 4.非线性期 （一）按血清酶的来源分 1.血浆固有酶 2.非血浆固有酶 ①外分泌酶 ②细胞酶 注：除凝血酶和纤溶酶外，血清酶与血浆酶基本一致 （二）按诊断特异性分 ①非器官特异酶 ②器官特异酶 　　（三）血清酶的去路 　1.肾小球滤过从尿液中排出 　2.网状内皮系统清除 　3.血管内失活或灭活 1.性别 2.年龄 3.饮食 4