项目十二植物种质资源的保存.PPT

项目十二 植物种质资源的保存 种质是亲代通过生殖细胞或体细胞传递给子代的遗传物质。 植物种质资源即为携带各种不同遗传物质的植物总称，又称遗传资源或品种资源，包括栽培，野生及人工创造的各种植物的品种或品系。 种质资源保存是指在天然或人工创造的适宜环境条件下，贮存植物种质，使其保持生命力与遗传性的技术。 种质资源保存主要有原地保存和异地保存两种方式。 原地保存主要通过建立自然保护区、天然公园来实现种质保存的目的； 异地保存则通过建立植物园、种质资源圃、种子库以及离体保存等方法来实现。 （二）3～4d后用不含脯氨酸的新鲜培养基将上述预处理过的悬浮细胞洗净、重新悬浮培养于新鲜培养基中。 （三）将含有20%脯氨酸的冷培养基分成4份并在1h内逐渐加入到等量的冷细胞悬浮液中。 （四）将混合液在冰上保存1h后，转移到灭过菌的聚丙烯安剖瓶中，盖好螺帽（每两个安剖瓶中用移液枪接入1mL混合液）。 （五）用可控降温仪以1℃/min的速度将按剖瓶冷却到-30℃，并停留30～40min后投入到液氮冰箱中进行贮存。 （六）解冻时，从液氮冰箱中取出安剖瓶，直接放到40℃水浴锅中，停留1～2min. （七）将混合液涂在琼脂平板培养基上进行重新培养。 （八）细胞生活力检查 马铃薯限制生长离体试管苗保存技术 （一）试管苗培养 （二）延长试管苗保存期 1.培养基中添加脱落酸和甘露醇 2.用塑料薄膜封闭试管口 3.加入适当多量的培养基 课后作业 1.超低温保存离体种质资源的原理和一般程序是什么？ 2.限制生长保存离体种质资源有哪些方式？ 3.细胞活力检测有哪些方法？ 4.有哪些冷冻保护剂？ 5.利用玉米悬浮培养体系学习实践植物种质资源的超低温保存技术。 6.利用马铃薯无毒苗学习实践植物种质资源的限制生长保存技术。 谢谢！ （5）再培养 指将已解冻的材料重新置于培养基上使其恢复生长的过程。再培养是检验冷冻保存效果或确定保存方法是否合适的最根本方法。 3、影响因素 预处理 冷冻 解冻方法 植物材料的性质 冷冻保护剂的使用 所使用的冷冻保护剂应具有以下特性： 分子质量较小 易于与溶剂混合 快速渗入细胞 无毒或毒性小 易洗脱 常用的是DMSO。 冷冻保护剂的作用： 降低冰点，促进过冷却和“玻璃化”状态形成 提高溶液黏滞性，阻止冰晶形成 增加细胞膜透性，加速胞内水分向外渗出 稳定细胞内大分子正常结构，阻止低温对膜的伤害 4、超低温保存后细胞或组织活力检测 根本方法是再培养 染色法：FDA、伊凡蓝法、TTC等 存活率公式： 存活率（%）= ×100% 重新生长的细胞（组织）数 解冻的细胞（组织）数 （三）生长抑制剂保存 高渗保存法 生长抑制剂保存法 饥饿法 矿物油覆盖法 低光照培养法 低压保存法。 1、高渗保存法 利用培养基的高渗透压来抑制离体培养材料生长的种质保存方法。 高渗物质：甘露醇、蔗糖、PEG等 高渗保存配合低温效果更明显 如：6~10℃低温下，培养基中加4%甘露醇，可保存马铃薯1 ~ 2年，存活率最高可达90%以上。 2、生长抑制剂保存法 在培养基中加入生长抑制剂以减缓培养材料的生长，达到长期保存种质材料的保存方法。 生长调节剂： ABA、青鲜素、CCC、多效唑、B9等 使试管苗生长缓慢，生长健壮、叶色浓绿、移栽成活率高。 3、饥饿法 从培养基中减去1~2种营养元素，使植株缺乏相关营养而处于最小生长量 4、矿物油覆盖法 使培养材料与空气隔绝，延缓生长 5、低光照培养 适当减弱光照强度，缩短光照时间，进而减缓试管苗生长 6、低压保存 降低培养材料周围气压，达到抑制生长的目的 分为低气压与低氧压两种，保存原理相似 * * * 教学目标 教学目标 1.掌握种质资源长期保存与中短期保存的方法。 2.掌握超低温保存的基本流程。　 3.能够根据离体材料的特点，离体保存种质材料。 项目介绍 工作任务 工作任务 一、超低温保存技术（以玉米为例） （1）新建玉米悬浮培养体系。 （2）新鲜培养基洗涤悬浮细胞。 （3）加入等量的冷冻保护剂脯氨酸。 （4）冰上保存1h。 （5）冷冻保存，先降温至-30℃，停留半小时， 再投入液氮。 （6）以40℃水浴解冻，然后培养。 二、限制生长离体试管苗保存（以马铃薯为例） （1）获得马铃薯试管苗。 （2）将马铃薯试管苗分割，接种MS培养基，培养基