用：1.2基因工程的基本操作程序.ppt

小结: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： （06年江苏卷）基因工程又叫基因拼接技术。 （1）在该技术中，用人工合成方法获得目的基因的途径之一是：以目的基因转录的_____为模板，____成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成______________。? （2）基因工程中常用的受体细胞有细菌、真菌、__________。若将真核基因在原核细胞中表达，对该目的基因的基本要求是_____________。 （3）假设以大肠杆菌质粒作为运载体，并以同一种限制性内切酶切割运载体与目的基因，将切割后的运载体与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶。连接产物至少有_______种环状DNA分子，它们分别是__________。 3）基因表达载体的组成： a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 它们各自的作用是什么? 二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构。 载体与表达载体有区别吗？ 基因工程的基本操作程序 第2课时 目的基因的获取 基因表达载体的构建 按照基因表达载体构建方法是否保证构建成功率100%？ 普通载体 表达载体 不含目的基因但有标记基因 含目的基因也含有标记基因 思考 目的基因 无标记基因 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程的过程。 三、将目的基因导入受体细胞 受体细胞是指在导入目的基因的细胞 一般要将带有目的基因的表达载体导入受体细胞。 转化: 三、将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入植物细胞 将目的基因导入动物细胞 将目的基因导入微生物细胞 （一）、将目的基因导入植物细胞的方法： （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点： 土壤中生活，易感染双子叶植物和裸子植物 ②原理：T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 感染 植物细胞 转移 植物细胞染色DNA 表达 新性状 导入 农杆菌 ③过程： 农杆菌法只适用于双子叶植物和裸子植物细胞，对单子叶植物不适用 ⑤优点：经济、有效 约80%的转基因植物都是通过这种方法获得的 ④适用范围： （2）基因枪法（微弹轰击法）： 是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 特点：成本较高 适用于单子叶植物 （3）花粉管通道法： 使目的基因借助花粉管进入受体细胞 我国科学家独创的一种基因导入方法 （二）将目的基因导入动物细胞的方法： 转基因动物最常用的受体细胞是受精卵 显微注射法： 将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中 显微注射仪 （三）将目的基因导入微生物细胞的方法： 原核细胞是基因工程中常用的受体细胞 原因： a、繁殖快 b、多为单细胞 c、遗传物质相对较少 d、易培养、成本低 大肠杆菌细胞转化过程： 感受态细胞吸收DNA分子 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 大肠杆菌细胞 感受态：细胞能吸收周围环境中DNA分子的生理状态 思考 导入的可能结果： 想一想导入过程完成后是否能保证受体细胞内一定含有目的基因，并且能在受体细胞内顺利表达？ a、导入普通载体 b、导入表达载体 c、导入目的基因（不含载体） d、导入没有成功 四环素抗性基因 氨苄青霉素抗性基因 根据标记基因所控制的性状进行筛选 筛选： 将菌接种在含四环素和青霉素的培养基上，选择出只能在含青霉素的培养基上生长的大肠杆菌。 四、目的基因的检测与鉴定 检测的目的是什么？ a、转基因生物的DNA上是否插入了目的基因 b、目的基因是否转录出了相应的mRNA c、目的基因是否翻译出了相应的蛋白质 d、转基因生物是否出现我们所需要的性状 基因探针： 用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子 a、转基因生物的DNA上是否插入了目的基因（关键步骤） 检测一： 常用方法：DNA分子杂交技术， 用基因探针进行检测 15N 15N 14N 14N 目的基因作探针 转基因生 物的DNA 加热 加热 显示杂交带，表明目的基因已插入染色体DNA中 冷却 检测二： b、目的基因是否转录出了相应的mRNA 常用方法：采用分子杂交技术， 用基因探针进行检测 目的基因作探针 杂交带 转基因生物的mRNA 分子杂交 显示杂交带，表明目的基因已转录出mRNA 检