基于ITS条形码的维药克孜力乔古鲁克药材的分子鉴定研究.PDF

环球中医药2017年6月第10卷第6期摇 Global Traditional Chinese Medicine,Jun2017,Vol郾10,No郾6 摇摇 587 ·论著 · 基于ITS条形码的维药克孜力乔古鲁克 药材的分子鉴定研究 马双双摇 王学勇摇 刘春生摇 肖瑶摇 赵保胜摇 张驰摇 李妍芃摇 王娟摇 田思敏摇 冯琼 揖摘要铱摇 目的摇 对维药克孜力乔古鲁克药材(Paeoniae radix hybridae,PRH)的品种进行精准鉴 别,同时将其原植物块根芍药 Paeonia hybrida Pall. 与窄叶芍药 P. anomala L. 和新疆芍药 P. sinjiangensis K.Y.Pan进行区分,为保证药材来源的准确性提供科学依据。方法摇 提取块根芍药的 DNA,基于内部转录间隔区的核糖体DNA序列(ITS)进行PCR引物扩增并测序,并从 GenBank数据 库下载块根芍药和其原变种窄叶芍药和近缘种新疆芍药的ITS序列,采用DNAMAN、Editseq、MeGA5 等软件,计算块根芍药种间、种内的Kimura 2鄄parameter(K 2鄄P)遗传距离,寻找块根芍药的特异位 点,并构建Neighbor鄄joining(N鄄J)系统聚类树。结果摇 块根芍药G+C含量范围为55.82% ~56.45%, 与另外两个种G+C含量未重叠;所有样本ITS序列的K2鄄P遗传距离范围为0 ~0.026,其中种间遗 传距离分布为0.014 ~0.026,大于块根芍药种内遗传距离0.000 ~0.012;通过序列比对分析,发现 块根芍药与另外2个种有6个特异位点;N-J系统聚类树也将19个样品聚为两个大支系,所有块根 芍药聚为一支,有84%支持率,其中中国地区分布的块根芍药聚为一小支,俄罗斯地区分布的块根 芍药亲缘关系较远。结论摇 经过遗传距离、系统聚类、特异位点分析等系统研究发现ITS序列能区 分块根芍药与其原变种窄叶芍药和近缘种新疆芍药,可以应用于维药PRH的精准鉴别,并且在变种 与原变种的区分方面有很大潜力。 揖关键词铱摇 克孜力乔古鲁克;摇 块根芍药;摇 内转录间隔区;摇 遗传多样性;摇 分子鉴别 揖中图分类号铱摇 R282.5摇 揖文献标识码铱摇 A摇 doi:10郾3969/ j郾issn郾1674鄄1749郾2017郾06郾011 Study of molecular identification of peoniae radix hybridae based on ITS barcode sequence摇 MA Shuangshuang,WANGXueyong,LIUChunsheng,et al.摇 Beijing University of ChineseMedicine Traditional Chinese Medicine College,Beijing 100102,China Corresponding author:FENG Qiong,E鄄mail:fengqiong64@ 揖Abstract铱摇 Objective摇 ToaccuratelyidentifythevarietyofPaeoniaeradixhybridaeanddistinguish Paeonia hybrida Pall. withPaeonia anomala L. andPaeoniasinjiangensis K.Y.Pantoprovide a scientific basisfor ensuring the accuracy of material sources.Methods 摇 Total genomic DNA was extracted from P. hybrida andinternaltranscribedspacer (ITS)wasamplifiedbyPCRandtheproduct senttosequence. ITS sequences of P. hybrida,P. anomala andP. sinjiangensis were downloaded from GenBank database. In鄄 terspecific and intraspecific Kimura 2鄄parameter(K 2鄄P) genetic distance, specific site