大鼠背根神经节细胞急性分散方法-rh.PDF

膜片钳技术系列手册（7） 大鼠背根神经节细胞急性分散方法 刘振伟 编写 （2015 年6 月27 日） 目 录 1. 简介 （2 ） 2. 实验条件与设备 （2 ） 2.1 实验室要求 （2 ） 2.2 仪器设备 （2 ） 2.3 常用工具与耗材 （3 ） 3. 实验动物 （3 ） 4. 实验试剂及配置 （3 ） 4.1 实验试剂 （3 ） 4.2 试剂配制 （3 ） 5. 实验操作 （4 ） 5.1 准备工作 （4 ） 5.2 剥离背根节 （4 ） 5.3 消化、分散与接种 （4 ） 6. 神经元形态观察 （4 ） 7. 注意事项 （6 ） 8. 膜片钳实验 （6 ） - 1 - info@ 1. 简介 背根神经节（Dorsal root ganglion , DRG ）又称脊神经节，位于脊神经的后根上，节内富含多种假单 极初级感觉神经元胞体，负责将躯体和内脏的感觉信号 （如痛觉、温觉、触觉、压觉、牵拉觉等）传入 至脊髓后 （背）角，完成初级感觉信息的传递 （图1）。DRG 初级感觉神经元是各种感觉信息从外周到 中枢的重要中转站和加工站，其膜上的受体、离子通道以及所释放的神经递质现已成为痛觉机制研究和 新型镇痛药开发的重要靶标。 DRG 神经元从胞体发出一个突起，然后呈 “T ”形分支，分别走向脊髓后角 （为中枢突）和沿脊神经 走向外周组织（周围突），走向外周的部分经其末梢形成感受器。 背根节 DRG 神经元 脊髓后角 后根 脊髓侧角 前根 脊神经 交感节 脊髓前角 灰交通支 白交通支 躯体感觉传入纤维 内脏感觉传入纤维 图1. 背根神经节的位置及纤维联系 本文介绍急性分散大鼠DRG 神经元常用的方法，该方法不仅可以获得形态非常好的DRG 分散神经 元，还非常适合于膜片钳技术实验。此外，本方法也可为培养DRG 神经元提供参考。 2. 实验条件与设备 2.1 实验室要求 细胞急性分离要求有独立无菌的细胞培养间，需要无菌操作，要求工作环境和条件必须保证无微生 物污染。细胞培养间内要配备常用设备，如紫外灯、倒置显微镜等。细胞培养间一般包括更衣间 （更换 工作服、拖鞋）、缓冲间（放置冰箱、无菌器械及物品）与洁净室（操作间，放置超净工作台、培养箱、 离心机、倒置显微镜等）。培养间内最好有空气过滤、层流装置。 2.2 仪器设备 必需的设备：CO2 培养箱、CO2 气瓶、超净工作台、解剖显微镜、倒置显微镜、低速台式离心机 （1,000-1,500 rpm）、电子天平（0.1 mg ）、pH 计、纯水机、冰箱、高压消毒锅、恒温水浴锅、恒温振荡 - 2 - info@ 器、电烤箱、酸缸。 选配的设备：