紫外分光计使用原理方法.ppt

?紫外分光光度计的使用原理和方法 紫外-可见分光光度法的特点： §1. 紫外-可见吸收光谱 1. 物质对光的选择性吸收 饱合有机化合物的电子跃迁类型为σ→σ*，n→σ* 跃迁，吸收峰一般出现在真空紫外区，吸收峰低于200nm，实际应用价值不大。 不饱合机化合物的电子跃迁类型为n→π*，π→π* 跃迁，吸收峰一般大于200nm。 过渡金属的电子跃迁类型为d电子在不同d轨道间的跃迁，吸收紫外或可见光谱。这些峰强烈受配位环境的影响。 例如 cu2+以水为配位体，吸收峰在794nm处，而以氨为配位体，吸收峰在663nm处。此类光谱吸收强度弱，较少用于定量分析。 1.4 影响紫外-可见吸收光谱的因素 物质的吸收光谱与测定条件有密切的关系。测定条件（温度、溶剂极性、pH等）不同，吸收光谱的形状、吸收峰的位置、吸收强度等都可能发生变化。 1.温度 在室温范围内，温度对吸收光谱的影响不大。 1.5 紫外-可见吸收光谱的应用 紫外-可见吸收光谱除主要可用于物质的定量分析外，还可以用于物质的定性分析、纯度鉴定、结构分析。 1.定性分析 吸光度: 为透光度倒数的对数，用A表示， 即 A=lg1/T=lgI0/It 二、朗伯-比尔定律 朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即 A= κ cl 式中比例常数κ与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。 §3. 紫外-可见分光光度计 一、主要部件的性能与作用 基本结构: 光源→单色器→吸收池→检测器→信号显示系统 §4 分析条件的选择 一、 仪器测量条件的选择 1.适宜的吸光度范围 由朗伯-比尔定律可知： A=lg1/T=εcl 微分后得： dlgT=0.4343dT/T= -εldc 或 0.4343ΔT/T= -εlΔc 通常是根据被测组分的吸收光谱，选择最强吸收带的最大吸收波长为入射波长。当最强吸收峰的峰形比较尖锐时，往往选用吸收稍低，峰形稍平坦的次强峰或肩峰进行测定。 二、紫外-可见分光光度计的类型 按其光学系统可分为单波长分光光度计和双波长分光光度计。 1.单波长单光束分光光度计 目前国内广泛采用721型分光光度计。具有结构简单、价格低廉、操作方便、维修也比较容易，适用于常规分析。 单波长单光束分光光度计还有国产751型、XG-125型、英国SP500型和伯克曼DU-8型等。 2.单波长双光束分光光度计 单波长双光束分光光度计有国产710型、730型、740型、日立UV-340型等就属于这种类型。 3.双波长分光光度计 双波长分光光度计的优点：是可以在有背景干忧或共存组分吸收干忧的情况下对某组分进行定量测定。 国产WFZ800-5型、岛津UV-260型、UV-265型等。 三、分光光度计的校正和检验 1.波长校正 2.吸光度校正 3.杂散光的检验 4.稳定性的检验 代入朗伯-比尔定律有： Δc/c=0.4343ΔT/TlgT 要使测定的相对误差Δc/c最小，求导取极小得出： lgT=-0.4343=A 即当A=0.4343时，吸光度测量误差最小。 最适宜的测量范围为0.2~0.8之间。 2.入射光波长的选择 3．? 狭缝宽度的选择 为了选择合适的狭缝宽度，应以减少狭缝宽度时试样的吸光度不再增加为准。一般来说，狭缝宽度大约是试样吸收峰半宽度的十分之一。 对多种物质进行测定，常利用显色反应将被测组分转变为在一定波长范围有吸收的物质。常见的显色反应有配位反应、氧化还原反应等。 二、显色反应条件的选择 * * 紫外-可见吸收光谱 朗伯-比耳定律 紫外-可见分光光度计 分析条件的选择 测定方法 在医学检验中的应用 紫外-可见分光光度法(ultraviolet-visible spectrophotometry, UV-VIS) 按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外