表达猪圆环病毒2型Rep蛋白的重组杆状病毒的构建与鉴定.pdfVIP

畜牧与兽医 2007年 第39卷 第10期 ■ 》试 验 研_究 《 表达猪圆环病毒2型Rep蛋白的 重组杆状病毒的构建与鉴定 秦承学，姜 平 ，王先炜，李玉峰，李艳伍，李军星 (南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095) 摘要：猪圆环病毒2型 (PCV2)是近年来新发现的引起断奶仔猪多系统衰弱综合征的主要病原，含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2，分别编 码复制相关蛋白 (Rep)和核衣壳蛋白 (Cap)。为了探究ORF1基因结构及其与功能的关系，本研究利用Bac—to-Bac杆状病毒表达系统将PCV2的 ORF1基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac Dual中，获得重组转移载体pFBD-ORF1，再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DHloBac 中，经蓝白菌落筛选获得含有ORF1基因的重组穿梭载体rBacmid-ORF1，经脂质体介导转染昆虫细胞sf9，获得重组杆状病毒rAc-Rep，SDS 和Western．blotting分析可见大小约为36 ku的特异性条带，表明rAc—Rep在sf 9中成功表达了PCV2 Rep蛋白。 关键词：猪圆环病毒2型；Rep蛋白；杆状病毒；表达 中图分类号：$858．282 文献标识码：A 文章编号：0529-5130(2007)10·0001·05 Construction and identification of recombinant insect baculovirus expressing Rep protein of Porcine Circovirus type 2 QIN Cheng—xue，JIANG Ping ，WANG Xian—wei，LI Yu—feng，LI Yan—WU，LI Jun—xing (Key laboratory of Animal Diseases Diagnostic and immunology，Ministry of Agriculture， Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，China) Abstract：Porcine circovirus type 2(PCV2)has been implicated as the etiological agent of a new disease，named postweaning muhisys· temic wasting syndrome(PMWS)．PCV2 contains two major open reading frames(ORFs)：ORF1 and ORF2，encoding replication·associat· ed(Rep)protein and capsid(Cap)protein，respectively．In order to find out the relationship between structure and function of Rep protein， the ORF1 gene of PCV2 was cloned into baculovirus transfer vector(pFastBac Dua1)using Bac·to·Bac baculovirus expression system．E． coli DHl0Bac containing baculovirus shutter vector(bacmid)and helper vector Was transformed with recombinant plasmid pFBD-ORF1．The colonies of E．coli containing recombinant bacmid(rBacmid-ORF1)were collected by blue／white selection．The rBacmid-ORF1 was trans· fected into sit)cells to yield Ac．NPV carryi