细胞生物学实验.ppt

实验四 细胞膜的渗透性 一、实验目的 1. 熟悉并理解细胞膜选择透性这一细胞基本生理活动。 2. 了解各类物质进入细胞的速度。 二、实验原理 细胞膜是细胞与外界环境进行物质交换的结构，它可选择性地让某些物质进出细胞。而对于不同性质的物质，细胞膜的通透性是大不一样的。当细胞与所处的环境存在渗透压差别时，水分子可从渗透压低的一侧向高的一侧扩散，以至于在高渗环境中，细胞会失水而皱缩；而在低渗环境中，细胞会吸水膨胀直至破裂。 由于溶质透入速度不同，溶血时间也不同。 三、实验用品 （一）仪器 50ml烧杯、10ml移液管、试管。 （二）试剂 0.17mol/L氯化钠 0.17mol/L氯化铵 0.17mol/L醋酸铵 0.17mol/L硝酸钠 0.12mol/L草酸铵 0.12mol/L硫酸钠 0.32mol/L葡萄糖 0.32mol/L甘油 0.32mol/L乙醇 0.32mol/L丙醇 （三）材料 鸡红细胞悬液 四、实验步骤 （一）鸡红细胞悬液 取50ml小烧杯一只，加入鸡血1份和10份0.17mol/L氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的鸡血。 （二）低渗溶液 取试管一支加入10ml蒸馏水，然后再加入1ml稀释的鸡血，注意观察溶液的颜色变化，由不透明的红色逐渐澄清，红细胞发生破裂，造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。 （三）鸡红细胞的渗透性 1.取试管一支加入017mol/L氯化钠溶液10ml，再加入1ml稀释的鸡血，轻轻摇动，注意是否有颜色变化？是否有溶血现象？为什么？ 2.取试管一支加入0.17mol/L氯化铵溶液10ml，再加入1ml稀释的鸡血，轻轻摇动，注意是否有颜色变化？是否有溶血现象？若发生溶血，记下时间（自加入1ml稀释鸡血到溶液变成红色透明澄清所需时间。 3.分别在下列等渗溶液中进行实验，步骤同2。 五、实验结果 将观察到的现象记录，并进行分析、比较。 1. 试管内液体分两层：上层浅黄色透明，下层红色不透明为不溶血（－），镜检红细胞完好呈双凹盘状。 2. 如果试管内液体混浊，上层带红色者，称不完全溶血（＋或＋＋），镜检有部分红细胞呈碎片。 3. 如果试管内液体变红而透明者，称完全溶血（＋＋＋），镜检发现细胞全部呈碎片。 六、实验报告 书写实验报告，并就细胞膜对不同物质的渗透性不同，对实验结果进行分析见表。 目测法判断标准：快速溶血：＋＋＋；慢速溶血：＋＋或＋；不溶血：－ 实验五 人淋巴细胞培养(一) 1. 原代培养 （primary culture）：从动物机体取出的进行培养的细胞群。原代培养的细胞生长比较缓慢，而且繁殖一定的代数后（一般10代以内）停止生长，需要从更换培养基。 2. 传代培养(subculture):培养细胞的生存环境是瓶皿或其他容器，生存空间和营养是有限的，当细胞增殖到一定密度后，需要分离出一部分细胞并更新营养液，这一过程称为传代。将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养（Passage）。 3. 细胞株（cell strain）：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群，能够繁殖50代左右，在培养过程中其特征始终保持。 4. 细胞系(cell line): 从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，在培养条件下可无限繁殖。原代培养经传代后形成的细胞群体，由多个生物学性状不同的细胞群体所组成，具有特殊的生物学性状或标记，分为: 有限细胞系 (finite cell line，多数是二倍体)不能连续传代或传代次数有限。 无限细胞系(infinite cell line多数为异倍体)可连续传代。有的无限细胞系在具永生性同时也有致瘤性，称为恶性转化细胞系 5.克隆（clone）：亦称无性繁殖系或简称无性系。对细胞来说，克隆是指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。 细胞克隆(cell cloning)：从一个单一母细胞繁殖出来的细胞群体，细胞克隆方法包括：稀释铺板法、饲养层克隆法、琼脂克隆法等。 实验内容及安排 一、细胞培养准备工作（清洗、消毒、灭菌） 二、培养基的配制 三、死活细胞的鉴别 四、细胞传代培养 五、细胞的计数、观察 六、细胞的调亡（选做） 一、实验目的 能独立地进行用于细胞培养的个中器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。 自学各类仪器用具清洗及各种消毒方法。 二、实验原理 清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。 体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌操作的要求程度很高。