细菌的形态学检查.ppt

微生物基本检验技术 华中科技大学同济医院检验科 致病菌的检验程序 直接涂片镜检 ↑ 涂片镜检 标本→分离培养→可疑菌落→ 生化反应 ↑ 血清学鉴定 分子生物学技术 药敏试验 动物试验 细菌形态学检查 1、不染色标本检查 2、染色标本检查 显微镜 普通光学显微镜 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜 电子显微镜 普通光学显微镜 最为常用的一种显微镜，普通显微镜用油镜可放大1000倍，可将0.25μm的微粒放大到肉眼可见的0.25mm,一般细菌大于0.25μm，故用普通光学显微镜可见。 暗视野显微镜 多用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察。 相差显微镜 主要用于检查不染色活细菌的形态及内部结构。 荧光显微镜 扫描电子显微镜 放大倍数可达数万至数十万倍，能分辨1nm的物体，可观察细菌表面和内部超微结构。 不染色标本检查 应用：主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况 常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野显微镜检查 不染色标本检查-压滴法 不染色标本检查-动力观察 动力+：可看到细菌自一处移至另一处，有明显的方向性位移 动力-：受水分子撞击细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无位置的改变。 染色标本的检查-常用染料 碱性染料 电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。细菌的等电点在pI2~5之间，易与带正电荷的染料结合而着色。常用的染料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。 酸性染料:电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。 通常用来染细胞质，而很少用于细菌的染色。常用的染料有伊红、刚果红等。 复合染料（中性染料）及荧光染料 复合染料是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料（伊红亚甲蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。用于某些特殊的染色技术。 脂溶性染料 如Sudan black。 染色标本的检查 染色方法的种类 单染法:采用一种染料染色 复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。 特殊染色 荚膜染色 特殊染色 负染色 （墨汁染色） 特殊染色 小 结 1、细菌形态学检查方法：不染色标本检查；染色标本检查 2、常用染色方法： 1）革兰染色 2）抗酸染色 3）荧光染色 * * 载玻片 细菌悬液 盖玻片 步骤： 结果: 阳性菌——紫色 阴性菌——红色 结晶紫初染 碘液媒染 乙醇脱色 复红复染 涂片固定 由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。 革兰染色法（Gram Stain） Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells. Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells Figure 步骤： 涂片固定 酸性复红初染 3%盐酸酒精脱色 美蓝复染 镜检 抗酸染色法 结果: 抗酸菌———红色； 非抗酸菌——蓝色。 步骤： 涂片固定 金胺O染色 盐酸酒精脱色 复染 镜检 荧光染色 结果: 抗酸菌—明亮橘黄色； 非抗酸菌-无荧光