产品简介：注意事项：质粒DNA浓度及纯度检测操作步骤-三博远志.PDF

产品简介： 操作步骤： 本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术，高效专一地结合质粒 DNA。同时采 1. 柱平衡步骤：向吸附柱CP5 中 （吸附柱放入50ml 收集管中）加入2.5ml 的平衡 用特殊的溶液P4 和过滤器CS，可有效的去除内毒素、蛋白等杂质；整个提取 液BL，8,000 rpm (~8,228×g)离心2 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新 过程仅需1 个小时，方便快捷。使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于各种常 放回收集管中。（用平衡液处理过的柱子最好立即使用）。 规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染多种细胞等实验。 2. 取100ml （根据培养菌体的浓度选择合适的量，低拷贝推荐用200ml ）过夜培养 推荐每次菌液使用量：高拷贝质粒推荐使用量为 100ml，得率一般在 的菌液加入离心管，室温8,000 rpm (~8,228×g)离心3 分钟收集细菌，尽量吸除 500~1000μg 左右； 低拷贝质粒推荐使用量为200ml，得率一般在200~400μg 上清。 左右。 注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中, 菌液量以 能够充分裂解为佳，菌液过多会导致裂解不充分从而降低质粒的提取效率。 注意事项： 3. 尽量吸除上清，为确保上清液全部吸取，请用干净的吸水纸吸去瓶壁上的水滴。 1． 溶液 P1 在使用前先加入 RNase A （将试剂盒中提供的 RNase A 全部加 4. 向留有菌体沉淀的离心管中加入7ml 溶液 P1 （请先检查是否已加入RNaseA）， 入），混匀，置于2-8℃保存。 使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。 2 ． 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液PW 中加入无水乙醇。 注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解效果， 3 ． 使用前先检查平衡液 BL、溶液P2 和 P4 是否出现结晶或者沉淀，如有结 导致提取量和纯度偏低。对于低拷贝质粒，加大菌体用量的同时按比例增加P1、 晶或者沉淀现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。 P2、P4 的用量。 4 ． 注意不要直接接触溶液P2 和P4，使用后应立即盖紧盖子。 5. 向离心管中加入7ml 溶液P2，立即温和地上下翻转6-8 次，室温放置5 分钟。 5 ． 使用过滤器时请将推柄小心缓慢地从过滤管中抽出，避免滤膜因压力而松 注意：温和地混匀，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮 动。