仪器操作-北京大学第一医院.DOC

EBV转化实验室进/出程序 一 进入： 1、将独立门卡贴近门禁面板开大门。 2、将带入物品放入传递窗，开消毒灯10分钟。 3、换拖鞋、戴一次性帽子、手套、穿隔离衣。 4、关好大门，开第二道门。 5、关好第二道门，开消毒间门。 6、关消毒灯，将传递窗（1）中物品移至传递窗（2），开消毒灯。 7、关好消毒间门，开第三道门。 二 离开： 1、将废弃物品转移至传递窗（2），开消毒灯。 2、洗手、摘手套。 3、开第三道门。 4、关好第三道门，开消毒间门。 5、关消毒灯，将传递窗物品取出消毒。 6、摘掉脏手套，洗手，戴新手套。 7、将消毒好物品包装后，放入传递窗（1），开消毒灯。 8、开消毒间门后，并关好门。 9、开第一道门。 10、关消毒灯，取出传递窗（1）中物品。 11、脱隔离衣、手套、帽子、换拖鞋，将手套帽子投入污物桶内。 12、开大门，带包装好的废弃物品离开。 细胞培养室安全和操作守则 位置：科研楼地下室东区 细胞培养室不同于其他实验室，要求在无菌条件下进行实验。所以每位做细胞培养的同人都要严格无菌操作，保持无微生物污染，以便实验顺利进行。 准备室 严格遵守培养器皿的洗刷、浸酸和消毒制度。 准备室分污染区和清洁区，污染区：是待清洗的器皿。清洁区：是器皿浸酸经水冲洗干净后，待消毒的器皿。 塑料制品勿用高压锅或烤箱消毒，可包装好后用钴60照射消毒。 培养瓶盖、橡胶塞子和细胞过滤器，要求分装包裹后用高压锅消毒0.15mpa 20分钟。 玻璃器皿可用烤箱消毒（160℃ 2.5-3小时） 使用高压锅消毒要按规定操作，有专人看管，以保证安全。 观察和操作室 进入操作室必须戴好口罩、帽子和鞋套（或换好拖鞋）方可入内。 实验前洁净台要紫外线消毒30-40分钟，并登记在登记本上。 正确使用细胞室的各种仪器 显微镜： 按显微镜使用须知操作。 离心机：使用前要将待离物品平衡好后再离心，拨动旋钮要慢。 二氧化碳培养箱：（1）开关门要快，不可将门长时间敞开着。 （2）培养液如果洒在培养箱内要及时清洁（用75%酒精或0。1%新洁尔灭）以防细菌污染。 （3）培养箱内水盘每周换一次，由值周人员负责。 4、细胞在培养过程中，如果发现瓶内液体浑浊，请不要打开瓶盖，及时处理，以防污染。 5、实验结束后用75%酒精清洁台面，将实验物品摆放整齐，及时清洗用过的器皿。 6、如果发现问题及时找工作人员联系 免疫组化实验室简介 位置：科研楼二层和五层东北角 免疫组化实验室现拥有先进的常规病理技术大型设备，包括：恒冷箱切片机、自动脱水机、石蜡切片机、包埋中心、图象分析系统。可开展经典病理学制片，特殊染色，免疫组织化学，原位杂交和其他分子病理技术。 免疫组化室使用注意事项及流程 安全守则 做实验必须经过中心实验室的同意，必须遵守中心实验室的一切规定。 小心使用仪器，恒温箱及水浴锅高温不可无人看管或过夜使用，使用后进行登记。 不能使用明火，以免引燃有机试剂。使用有毒害可挥发液体操作需在通风厨内进行。 如果晚上做实验需要提前说明。 最后离开时，必须关上机器、关上电源。 保管好个人物品，一切自带物品丢失责任自负。 标本处理注意事项： 新鲜组织应及时固定，一般推荐使用10％福尔马林固定6－24小时。切成不超过1.5╳1.5╳0.5cm3大小的组织块。根据特殊检查（特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位杂交）的需要，选择其它适宜的固定液进行固定。如果需要进行脱水、浸蜡程序请与负责老师联系。 包埋中心使用注意事项： 需与负责老师预约好使用时间，并提前准备好组织块。 实验耗材由实验室提供。 使用结束后需清理干净石蜡残渣。 石蜡切片机使用注意事项： 1.使用前请提前预约。 2.自己准备中楷毛笔及干净镊子和载波片。 3. 使用结束后应清理干净所有残渣，使用冰冻切片机者应购买一次性刀片及借用圆托。 自己准备好冻存的标本OCT和涂有防脱片剂的载玻片。 使用结束后应清理干净所有残渣，刀位调至中位处，在一般情况下维持在0℃左右，不必关机。 流程： 冰冻切片保存于70℃，用冰甲醇及丙酮各固定5分钟。石蜡切片用脱蜡，用乙醇及PBS洗后加入修复液，在微波炉中修复抗原。 PBS洗片后用封闭液封闭一小时，用生物素标记的二抗者需先用H2O2阻断内源性过氧化物酶。 PBS洗标本后加入一抗在室温下作用一小时。 用清洗液洗三次，每次5分钟。 加入二抗，室温下作用一小时。 在清洗液中洗三次，每次5分钟。 若二抗为荧光抗体应在暗盒中操作及保存，然后用荧光显微镜照相。 8．若二抗为生物素标记，应该用链亲和素结合的辣根过氧化酶再作用一小时，然后清洗3次，每次5分钟，然后用DAB显色。若二抗为碱磷酶标记，则用NBT/BCIP显色。 显