实验报告二液相.docx

实验报告课程名称：生物仪器分析 指导老师： 成绩：__________________________实验名称： 液相应用 实验类型：探究 同组学生姓名：一、实验目的和要求 二、实验内容和原理三、主要仪器设备 四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析七、讨论、心得实验目的和要求1、学习高效液相色谱仪(HPLC)的原理和使用方法。2、利用HPLC分析有机酸的特征和含量。3、了解保留时间、吸收光谱特征与结构之间的关系实验内容和原理内容：测定有机酸混合标准品的色谱。测定未知浓度的水果（火龙果）的液相色谱。计算该水果的有机酸含量。原理： 储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内；由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出；通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。 在适宜的条件下，高效液相色谱可分离溶液中的不同组分。样品进高效液相色谱仪，经反相C18液相色谱分离后，以色谱峰的保留时间定性，利用色谱峰面积在一定范围内与浓度成线性关系进行定量。本实验采用外标法，用紫外检测器测定有机酸混合标准品，分析未知浓度的水果（火龙果）中有机酸含量。三、主要仪器设备1、仪器：岛津高效液相色谱仪（ LC-20AT，日本 Shimadzu公司），主要由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据记录与处理系统五部分组成。还配有辅助装置，如自动进样系统。 2、材料和试剂：甲醇,有机酸混合标准液,火龙果样品溶液。 3、色谱条件：流动相：乙腈/重蒸水＝80/20（V/V），流速1.0mL/min；0.05mol/ml(NH4)2PO4；柱温：30℃；进样量：10uL；氨基柱：4.6×250mm；C18柱；紫外检测器：SPD-20A；示差检测器：RID-10A。四、操作方法和实验步骤 1、开机, 依次接通分离单元、检测器、计算机的电源。 2、流动相脱气，确认所有溶剂管路都充满溶剂。 3、启动溶剂管理系统，冲洗自动进样器和进样针，装入样品与转盘，编辑分析方法及执行样品分析表。 4、样品测定： 色谱条件：可溶性糖测定：色谱柱（NH2柱，4.6mm x 250mm, 5 μm）；流动相，乙腈：水=8:2（v/v）；流速， 1ml／min；柱温：30℃。 有机酸测定：C18柱；紫外检测器：SPD-20A；流速1.0mL/min；流动相：0.05mol、ml(NH4)2PO4； 柱温：25℃ 单点外标法定量：取标准品和类样品溶液20μL注入高效液相色谱仪进行分离。记录各个峰的峰面积。按下式计算相对含量(浓度)： 5、关机，使用完毕，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针和柱塞杆密封垫，关闭电源开关。数据采集完毕后，关闭紫外检测器电源开关。处理数据后，关闭计算机电源开关，并做使用登记。五、实验数据记录和处理H3H4样品第一次样品第二次样品第三次1、标准品H3浓度μg/mlH4浓度μg/ml出峰时间/minH3面积H4面积柠檬酸0.040.063.0左右397878622638苹果酸0.40.65.2左右2473237477酒石酸0.40.67.49左右149069226140样品第一次面积第二次面积第三次面积柠檬酸136748249421126157苹果酸139784716216241248110酒石酸274384455660272第一次浓度μg/ml（H3）第二次浓度μg/ml（H3）第三次浓度μg/ml（H3）第一次浓度μg/ml（H4）第二次浓度μg/ml（H4）第三次浓度μg/ml（H4）柠檬酸0.01370.02510.01270.01320.02400.0122苹果酸22.6126.2320.1922.3825.9619.98酒石酸0.07360.1200.1620.07280.1180.160实验结果与分析1、用H3标准品和H4标准品测得的值基本相同，说明H3和H4标准品都比较标准，可以用于本次实验结果的计算。1、样品中，柠檬酸浓度第二次明显高于其他两次，是由于第二次液相时，中段集体向上漂移的原因，计算平均值时建议舍去，所以可得样品中柠檬酸浓度=0.0130μg/ml。2、苹果酸的出峰位置在5.2min左右，但是样品中在5.2min处没有明显的峰，只有在5.8min处有一个较明显