补体的检测.PPT

1.已知补体的活化有三条途径，试述三条激活途径有何不同？ 2.试述补体在抗感染免疫中有何作用？ 3.补体有30余种成分，各自的作用不同但相互联系，补体的网络系统中起关键作用的成分是哪几个？ 4.补体在参与机体免疫系统效应中发挥的主要作用是什么？ 5.应用补体检测抗原抗体的方法有几种？有无你认为可以建立但尚无人提及的？ 6.补体在参与人类疾病的病理损伤中发挥什么作用？ 7.机体的免疫损伤或炎症多发生于什么情况下？损伤的机制是什么？ 8.试比较各种补体检测方法的优缺点和如何进行临床应用选择？ 9.补体缺陷所表现的主要临床特征是什么？ 10.补体的主要理化特点是什么？ （二）正式试验 分类:小量法、微量法，以小量法常用 实验过程: 稀释和处理后的标本与已知抗原或抗体、不同含量的补体温育 与指示系统共育 结果判度: 对照管: 阴性对照管:溶血 阳性对照管:不溶血 抗体或抗原对照管:完全溶血 待检血清对照管:完全溶血 绵羊红细胞对照管:不出现自发性溶血 补体对照管： 受检血清 阳性:不溶血 阴性:溶血 注意: 若上述各对照管不出现预期结果，则试验结果不可靠，其可能原因应根据出错的对照管进行分析。 2个单位:全溶 1个单位:全溶或略带少许红细胞 0.5个单位:不发生溶血 三、方法评价 优 点 灵敏度高、所测定的抗体水平可达0.05μg/ml ， 出现交叉反应的机率较小， 可检测的抗原或抗体范围广泛， 无需特殊设备、结果容易观察、试验条件要求不高 现 状 影响的因素多、各种制剂需要烦琐的稀释和滴定等， 现代化、自动化抗原抗体检测方法的不断涌现，补体结合试验逐渐被遗弃 补体结合试验作为一种经典的免疫方法类型，其设计和原理仍对新型免疫方法的建立有着启迪和指导作用 第四节 单个补体成分的测定 常作为单个补体成分的检测指标：C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物等 测定方法： 免疫溶血法 （检测单个补体成分的活性） 免疫化学法（检测单个补体成分的含量） 自动化免疫散射比浊法 一、免疫溶血法 定义:是根据补体参与抗体介导溶细胞作用的级联效应特征建立的单一补体成分检测法 指示系统:以SRBC-抗SRBC为激活物和指示系统 参照体系:以人为设计的缺乏某种补体成分的血清为参照 结果判度:若有溶血发生，表明待检标本存在参照血清所缺乏的补体成分，且溶血程度与此补体成分的量呈正比，仍以50％溶血为终点 参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除某种补体成分之意。已能筛选到的血清有人C2缺乏、豚鼠C4缺乏、小鼠C5缺乏和家兔C6缺乏的血清 免疫溶血法常用于C2、C3、C4、C5、C6等补体成分的检测。其中以C3、C4两成分的检测更为常见 二、免疫化学法 免疫化学法分类 1.单向免疫扩散 2.火箭免疫电泳 3.透射比浊法 4.散射比浊法 前两种方法：手工操作繁琐、耗时长、影响因素多、结果重复性差，已趋于淘汰 后两种方法：通过仪器对补体的C3、C4、B因子等单个成分进行自动化测定 第五节 补体测定的临床应用 补体相关试验： 诊断梅毒螺旋体感染的华氏反应（已淘汰） HLA分型的补体依赖性细胞毒试验 抗原抗体检测的脂质体免疫试验、免疫粘连血凝试验 抗体形成细胞定量检测的溶血空白斑技术 免疫复合物测定的胶固素结合试验和C1q结合试验 应用于补体含量和活性检测的试验 AP-CH50和AP-H50试验: 反映总补体活性 溶血试验 免疫化学试验 免疫荧光技术 检测补体单个成分及其裂解产物（C1q、C3SP 、C3、C4、B因子等）和补体受体 (图)血管神经性水肿 补体含量和活性相关的疾病 1．免疫相关性疾病： 如自身免疫性疾病时，C1、C2、C3、C4和Hf等缺陷； 超敏反应时（III型超敏反应），C3a、C5a等过敏毒素的产生。 2．与补体有关的遗传性疾病： ①C2、C3缺陷导致的严重感染； ②与C1抑制物缺陷相关的遗传性血管神经性水肿 ③SLE患者出现的细胞表面CR1缺陷与C1C清除障碍 ④涉及I因子、H因