项目1-4谷氨酸发酵工艺过程控制-天津职业大学.PPT

(1)熟识好氧细菌的扩大培养技术。 (2)了解谷氨酸发酵(好氧发酵)的方法及发酵条件对代谢产物的影响。 (3)学习用纸上层析法与比色法对谷氨酸进行定性与定量测定。 一、种子扩大培养的任务 二、种子制备的过程 ⒈ 孢子制备 ⑴ 放线菌孢子的制备 菌种进入种子罐有两种方法： 孢子进罐法 摇瓶菌丝进罐法 种子罐的级数主要决定于菌种的性质和菌体生长速度及发酵设备的合理应用。 种子罐级数减少，有利于生产过程的简化及发酵过程的控制，可以减少因种子生长异常而造成发酵的波动。 三、种子培养 ⒈ 表面培养法 ⒉ 固体培养法 ⒊ 液体深层培养 四、种子质量的控制 ㈠ 影响孢子质量的因素及其控制 ⒈ 培养基 ⒉ 培养温度和湿度 例如：龟裂链霉菌斜面 ⒊ 培养时间和冷藏时间 ⑴ 孢子的培养时间 ⑵ 孢子的冷藏时间 ⒋ 接种量 分批发酵条件下，黄色短杆菌TK0303的菌体形态变化 ⒌ 种子质量标准 ⑴ 细胞或菌体 ⑵ 生化指标 ⑶ 产物生成量 ⑷ 酶活力 ⒍ 种子异常的分析 ⑴ 菌种生长发育缓慢或过快 ⑵ 菌丝结团 ⑶ 菌丝粘壁 3.样品浓度要求每小格内有5～10个菌体为宜。 4.计数时，用16×25的计数板要按对角线方位，取左上、左下、右上，右下四个中方格(即100小格)计数酵母菌液，用25×16的计数板，除计数上述对角线的四个方格外，还需数中央一个方格的酵母菌数(即80小格)。 5.每个样品重复计数2～3次，取其平均值，按上述公式计算每毫升菌液所含的酵母细胞数。 6.计数完毕，将计数板在水龙头上冲洗，切勿用硬物洗刷，自行晾干或吹风机吹干，或用擦镜头纸轻轻擦拭。 使用血球计数板对样品酵母菌液进行计数，并计算菌液浓度。 将微生物计数的结果填入下列空白1.第一次计数的酵母细胞数目＝ 个。2.第二次计数的酵母细胞数目＝ 个。3.从两次的计数结果中求出酵母细胞的平均数目4.稀释倍数＝ 倍。5.求出每毫升酵母菌液中的细胞数＝ 个。 3. 0.2%淀粉指示剂100mL 称取0.2g可溶性淀粉，用少量水调成糊状，溶于100mL沸水(蒸馏水)中，继续煮沸至溶液透明。冷却，贮于玻璃塞瓶中备用。(新配制) 4. 吸管（2、5、25mL）、酸式滴定管、试管、洗耳球、小漏斗、铁架台、100mL量筒、250mL碘量瓶、5L发酵罐 3.移取2mL反应液于装有25mL 0.05mol/L碘标准溶液的250mL碘量瓶中，加预先煮沸冷却水50mL，然后用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色，再加入0.2%淀粉指示剂5mL，此时溶液呈深蓝色，继续用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色刚好消失。 ⒈ 微生物有哪些特点?试举例说明微生物的工业应用。 ⒉ 工业生产中使用的微生物菌种为什么会发生衰退？菌种衰退表现在哪些方面？防止菌种衰退的措施有哪些？ 谢谢！ 制药微生物发酵技术 训练项目1 1 种子的制备和扩大培养 放线菌 制药微生物发酵技术 训练项目1 1 种子的制备和扩大培养 霉菌菌丝 菌丝团 训练项目2 制药微生物发酵技术 2 微生物细胞数的计数和菌浓的测定 一、项目指导 血球计数板是一块比普通载玻片厚的特制玻片制成。玻片中央刻有四条槽，中央两条槽之间的平面比其它平面略低，中央有一小槽，槽的两边的平面上各刻有9个大方格。中间的一个大方格为计数室，它的长、宽各为1mm，深度为0.1mm,容积为0.1mm3。计数室有两种规格，一种是把大方格分成16个中格，每一中格分成25小格，共计400小格；另一种规格是把大方格分成25中格，每一中格分成16小格，总共也是400小格。 训练项目2 2 微生物细胞数的计数和菌浓的测定 制药微生物发酵技术 血细胞计数板正面、侧面与正面方格放大示意图 训练项目2 2 微生物细胞数的计数和菌浓的测定 制药微生物发酵技术 因此，在计算上可按下列两种公式进行： 1. 16×25计数板的计算： 细胞数/mL= （100小格内的细胞数/100）×400 ×10000 ×稀释倍数 2. 25X16计数板的计算： 细胞数/mL= （80小格内的细胞数/80）×400 ×10000 ×稀释倍数 式中，400为计数板的小格总数； 10000为由计数室0.1mm3换算成lmL体积的系数 1.材料 酵母菌悬液 2.用具 显微镜、血球计数板 二、材料和用具 训练项目2 2 微生物细胞数的计数和菌浓的测定 制药微生物发酵技术 1.取清洁干燥的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。在显微镜下找到计数室。 2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多)。菌液可自行渗入计数室。计数室不得有气泡，然后置