lgG Beads 4FF 1203 - 常州天地人和生物科技有限公司.PDF

IgG Beads 4FF 目录 1. 产品介绍………………………………………………………………….……..1 2. 纯化流程………………………………………………………………………...1 3. 问题及解决方案……………………………………………………………….2 4. 订购信息及相关产品…………………………………………………………3 1. 产品介绍 IgG Beads 4FF 是以人IgG 为亲和配体 ，一步纯化原核表达系统 生的蛋白A 融合 品。 Protein A 是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白，主要通过 Fc 片段结合哺乳动物 IgG。IgG Beads 4FF 是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质 ，可以在相对较高的流速下进 行纯化。具体性能见表1。 表1. IgG Beads 4FF 品性能 指标 性能 基质 高度交联的4%琼脂糖微球 配体 人IgG 载量 2mg 蛋白A/ml 介质 粒径 (μm) 45-165 最大流速 0.3 MPa, 3 bar pH 稳定范围 3-12 储存缓冲液 20% 乙醇 储存温度 2°C - 8°C 2.纯化流程 2.1 Buffer 的准备 所用水和 Buffer 在使用之前建议用0.22μm 或0.45 μm 滤膜过滤。 结合/ 洗杂 Buffer: 0.15M NaCl, 20 mM Na HPO , pH 7.0 2 4 洗脱 Buffer: 0.1M 甘氨酸 ，pH 3.0 中和液：1M Tris-HCl ，pH8.5 2.2 样品准备 上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH 值 ，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、 腹水或细胞培养液稀释 ，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。 样品在上样前建议离心或用0.22μm 或0.45μm 滤膜过滤 ，减少杂质，提高蛋白纯化效率 和防止堵塞柱子。 2.3 IgG Beads 4FF 装填 1 / 3 州天地人和生物科技有限公 司 IgG Beads 4FF 被广泛应用于工业纯化，因此，涉及到各种中压色谱层析柱的填装 ，下面 介绍使用 IgG Beads 4FF 填装层析柱的方法。 层析柱的装填 （使用储液器装填） 1. 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接 ，确保柱底筛板上无气泡 ，关闭柱底出口，并在柱 底部留出1-2cm 的去离子水。 2. 将树脂悬浮起来 ，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减 少气泡的产生。 3. 如果使用储液器 ，应立即在层析柱和储液器中加满水 ，将进样分配器放置于浆液表面 ， 连接至泵上 ，避免在分配器或进样管中产生气泡。 4. 打开层析柱底部出口，开起泵 ，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层 析柱 ，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击 ，也可以避免柱床形 成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速 ，可以用你所使用泵的最大流速，这样也可以得 到一个很好的装填效果。（注意：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75% ）当 柱床高度稳定后 ，在最后的装柱流速下至少再上3 倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。 5. 关闭泵 ，关闭层析柱出口。 6. 如果使用储液器 ，去除储液器 ，将分配器至于层析柱中。 7. 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器 ，锁紧分配器接 。 8. 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以 新调整分配器。 2.4 样品纯化 1. 将 IgG Beads 4FF 装入合适的层析柱 ，层析用5 倍柱体积的结合Buffer 进行平衡 ，使 填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。 2. 将样品加到平衡好的IgG Beads 4FF 中（保证目的蛋白与IgG Beads 4FF 充分接触