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中心实验室实验指南凝胶染色-中国医学科学院北京协和医院中心实验室
中心实验室实验指南
凝胶染色
作者:郭丹
修订日期:2014-9-16
【目的及应用】:
对SDS后的凝胶进行染色
【试剂及设备】:
1.试剂
考马斯亮蓝 G350, R250, H PO ,(NH ) SO ,甲醇,冰醋酸,硫代硫酸钠(5%),醋酸钠,戊二醛溶
3 4 4 2 4
液(25%),硝酸银溶液(2.5%) ,甲醛溶液(37%) ,NaHCO3 ,EDTA 二钠盐
2. 设备
脱色摇床
【实验步骤】:
1. 经典考染的方法及步骤
(1) 试剂的配置
1) 10×phast Gel Blue R350 储存液 200ml
phast Gel Blue R350 1 片
去离子水 80ml
混合后搅拌均匀 5~10min
甲醇 120ml
充分搅拌使其溶解,0.45μM 过滤,室温下存放,即为0.2%考染储存液(10×)
2) 脱色液配置
甲醇3 300ml 600ml 900ml 1200ml
乙酸1 100ml 200ml 300ml 400ml
去离子水6 600ml 1200ml 1800ml 2400ml
编号 :PUMCHCL-P-3-Q02-1 北京协和医院中心实验室
更新日期:2014/09/16 第1 页,共5 页
中心实验室实验指南
总体积 1L 2L 3L 4L
3) 1×考染工作液的配置(0.02%)
10×储存液:脱色液( 甲醇:乙酸:水=3:1:6)
100ml :900ml
(2)经典的考染步骤
步骤 试 剂 时间
1) 固定(此步骤为可选) 20% TCA(三氯乙酸) 1h
2) 染色 1×考染工作液(0.02%) 2h
3) 脱色 脱色液 2×30min
4) 清洗 去离子水 2×5min
凝胶可以过夜染色,具有固定和染色双重作用;
固定步骤为可选项,其优点在于能够使背景更干净;
对于结合有玻璃板的凝胶其染色脱色等均为单面,故各步骤时间应当加倍。
2. Neuhoff 胶体考染法:
(1) 试剂配制
1) solution A 780ml
H PO (ortho-phosphoric acid) 20ml (2%v/v)
3 4
(NH ) SO ammonium sulfate) 100g (10%w/v)
4 2 4 (
加入去离子水至780ml
2) solution B: 20ml
CBB G250 1g (0.1%w/v)
去离子水 20ml
3) solution C: solution A+ solution B= 800ml
solution A 780ml
solution B 20ml
将两者混匀后不能过滤,可以室温下存放。
4) solution D:
染色临用前在 800ml 的C 溶液中加入200ml 的甲醇,使其终浓度为20% (v/v) ,
总体积为1000ml
编号 :PUMCHCL-P-3-Q02-1
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