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利用简并引物克隆黑莓、树莓肌动蛋白基因片段及表达分析
物技术道摆
· 研 究 报 告 · BIOTECHNOL0GY BULLETlN 2011年 第 8期
利用简并引物克隆黑莓、树莓肌动蛋白
基因片段及表达分析
张春红 王小敏 王鲁北 吴文龙 李维林
(江苏省中国科学院植物研 究所 ，南京 210014)
摘 要 ： 采用 同源克隆法 ，利用设计的一对肌动蛋 白(actin)基 因简并引物 ，从黑莓、树莓和悬钩子杂种 3个悬钩子植物
品种均得到一条743bp的actincDNA片段 ，推测编码247个氨基酸。序列 比对发现 ，克隆的actin基 因推导的氨基酸序列和其
他植物的肌动蛋 白氨基酸序列具有高度保守性，经数据库有哪些信誉好的足球投注网站后将来 自黑莓和树莓品种 的actincDNA片段在 GenBank中登
录 ，登录号分别为 HQ439558和 HQ439559。不 同来源的植物 actin蛋 白系统进化树 的聚类结果表 明，树莓和悬钩子杂种亲缘
关系较为密切 。actin基 因在3个悬钩子植物品种不 同组织中的RT．PCR分析结果表 明，其在检测的不 同组织 中均有一定程度
的表达量 ，可能都属于组成型表达的肌动蛋 白基 因。研究结果为利用actin基 因作为 内参进一步研究黑莓和树莓其他基 因的
丰度奠定基础。
关键词 ： 悬钩子 肌动蛋 白基 因 简并 引物 序列分析 半定量 RT—PCR
CloningandExpressionAnalysisofActinGeneFragmentfrom
BlackberryandRaspberryUsingDegeneratePrimers
ZhangChunhong W angXiaomin W angLubei W uW enlong LiW eilin
(InstituteofBotany，JiangsuProvinceandtheChineseAcademyofSciences，Nanjing210014)
Abstract： Inthisreport，thecDNA fragmentof743bpencoding247aminoacidresidueswassimilarlyclonedfrom blackberry，
raspberryandrubushybridberry cultivarsbyhomologouscloningusingapairofdegenerateprimers．Multiplesequencealignmentand
databasesearch resuhsshowedthatthethreeaminoacidsequencesdeducedrfom theclonedactincDNA sequencesexhibitedhighcon—
servationwiththosefrom otherplants．Consequently，theactincDNA sequencesrfom blackberryandraspberrycuhivarsweresubmitted
intoGenBankandtheaccessionnumberswereHQ439558andHQ439559respectively．Phylogenyanalysisbyusingdifferentplantactin
proteinsourcesshowedthattheactinproteinrfom raspberryandrubushybridberry cultivarshadclosegeneticrelationship．RT—PCRa—
nalysisofthreeactingenesrfom differentrubuscuhivarsshowedthattheyuniformlyhadexpression levelindifferenttissuesdetected
and thusmaybelongtoconstitutiveexpression．Theresultslaidbasisforidentificationofgenetranscriptionle
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