第二十一章色谱联用分析法(第七版.pptVIP

2．高效液相色谱-质谱联用的应用和分析条件  液相色谱－质谱联用技术在药学、临床医学、生物学、食品化工等许多领域的应用越来越广泛。 HPLC-MS分析实验条件的选择： （1）流动相和流量：常用流动相为水、甲醇、乙腈及它们的混合物，可用醋酸、甲酸或它们的铵盐溶液调节pH ，应避免磷酸盐或离子对试剂等。流量对LC-MS分析有较大影响。 （2）离子检测模式：碱性物质选择正离子检测模式，可用醋酸或甲酸使试样酸化至pKa－2。酸性物质及含有较多强电负性基团的物质，选择负离子检测模式。 （3）温度：接口的干燥气体温度应高于待分析物沸点20℃左右，同时要考虑物质的热稳定性和流动相中有机溶剂的比例。 三、毛细管电泳－质谱联用 CE的高效分离能力与MS鉴定结构能力的有机结合 若实现毛细管电泳-ESI-质谱联用，须解决的问题： ①电压匹配问题。 ②CE是依赖电渗作为流体的动力，若与质谱联接时，质谱的高真空与CE造成的真空差，将会引起CE的电渗流的扰动，破坏分离。 ③CE的进样量小，要求MS要有很高的灵敏度。 ④CE分离工作大都是使用磷酸盐缓冲溶液来完成，与MS联用时，只能用易挥发盐的缓冲盐溶液。 四、色谱－质谱的扫描模式及 其提供的信息 色谱-质谱联用分析扫描模式 全扫描（full scanning） 选择离子监测(SIM) 选择反应监测(SRM) （一）全扫描 全扫描是质量分析器在给定的时间范围内对给定质荷比范围进行无间断地扫描，获得样品中每一个组分（或在某一特定时刻）的全部质谱。在这种扫描模式下，可以获得各种定性和定量信息。 1．色谱－质谱三维谱 X坐标表示质荷比m/z，Y坐标表示时间或连续扫描的次数，Z坐标表示离子流的强度(离子丰度)。 2.质谱 将全扫描得到的分子离子 或准分子 离子（[M+H]+、[M－H]?、[M+Na]+等）及所有碎片离子的质荷比与其对应的离子流的相对强度作图 给出总离子流色谱图上每一个色谱峰的质谱 3.总离子流色谱图（TIC）是总离子流强度随时间（扫描次数）变化的色谱图 其中对应某一时间点的峰高是该时间点流进的组分的所有质荷比的离子强度的加和。 给出保留值、峰高和峰面积 4.质量色谱图 是从计算机存储的总离子流色谱图的数据中，按质荷比调出的色谱图。 质量色谱可以鉴别某化合物或具有某基团的一组化合物的存在。 即使没有实现色谱完全分离的峰也可进行定量。 （二）选择离子监测 选择离子监测是对一个或一组特定离子进行检测的技术。 只检测一个质量的离子称为单离子监测(SIM) 检测多离子的称为多离子检测(MID) 选择离子监测可以把全扫描模式所得的复杂的总离子色谱图变得非常简单，即获得的质量色谱图。提高了灵敏度，同时有更快的扫描速度。选择离子监测主要用于定量分析。 （三）选择反应监测选择反应监测是串联质谱的一种检测模式，即监测一个或几个特定的离子反应，监测几个离子反应又称为多反应监测(MRM)。 选择反应监测能对复杂混合物中的痕量组分进行快速鉴别和定量分析，选择性高，灵敏度高。 此外，产物离子扫描、前体离子扫描和中性丢失扫描三种模式也是串联质谱的检测模式。 第二节 其他联用分析法 一、气相色谱－傅立叶变换红外光谱联用 （一）气相色谱－傅立叶变换红外光 谱联用仪器 由气相色谱仪、接口、傅立叶变换红外光谱仪及计算机系统四部分组成。 在相应软件控制下，仪器进行实时傅立叶变换，在显示器上实时显示GC馏分的气态IR谱图其x轴为波数，y轴为吸光度，z轴为时间 （二）气相色谱－傅立叶变换红外光谱联用获得的谱图 1.实时三维谱图 2.重建色谱图 在相应软件控制下，仪器进行实时傅立叶变换，在显示器上实时显示GC馏分的气态IR谱图，其x轴为波数，y轴为吸光度，z轴为时间 由红外检测器记录的干涉图经计算机处理后得到的色谱图 3．红外光谱图 （1）化学图 （2）Gram-Schmidt重建色谱图 （3）红外总吸收度重建色谱图 重建色谱图包括： 二、高效液相色谱－核磁共振波谱联用 核磁共振波谱是测定有机化合物结构的最强有力的技术之一 但是实现这种联用又是最具有挑战性的一门技术 ①HPLC流动相中的质子严重干扰组分的1H-NMR谱 ②梯度洗脱时，溶剂的浓度不断变化，δ值也不 断变化 ③核磁共振波谱的灵敏度较低 ④NMR难于与HPLC在线联用