β-半乳糖苷酶染色-南京医科大学.doc

作者修回说明如下 尊敬的南京医科大学编辑部编辑先生、女士: 您好,首先向各位专家对本文提出的建议及指正表示感谢，因为个人缺乏投稿经验，在第一次修回过程中未将改动的地方标出，更未一一回答审稿人的问题，在此给审稿人带来的不便致以诚挚歉意。以下将各位审稿人提出的问题，做出回答，并按照贵刊的要求作了详细修改，且在修改过的地方在文章中用“红色”标记出，尚有不妥之处敬请指正。 1.现已将英文摘要及分组的描述做出了修改并标记；对于p-smad的western条带与量化图也做了更正；并在所有实验结果描述部分均详细写出了蛋白上调或下调的具体数值。 2.对于审稿人提出“如果想要真正深入研究AGEs 对心肌成纤维细胞的老化作用研究，是否考虑做一些在体的工作再结合机制的研究更好？”，我们课题组对此正在进行相关临床研究，且也曾报道过AGEs与老年人血管硬化及心脏舒张功能的相关关系。 3.对于审稿人提出实验设计简单的问题，笔者会在以后的工作中对老化相关问题继续做进一步的研究。而在此次修回稿中我们也相应的补充了研究数据，包括TGFβ/smad通路抑制剂干预后，老化相关指标的变化情况，以及TGFβ1、p-smad、MMP-2的表达水平，并对文章的题目稍作变动，现改为“晚期糖基化终产物对心肌成纤维细胞老化及纤维化的影响”。此外，将每张附图的图题、图引标出，重复检测的样本数等也在文章中加以标注，并对标注和书写有误的地方做了修正。若有不当之处，请加以指正。 此致 敬礼晚期糖基化终产物对心肌成纤维细胞的老化 [摘要]目的:探讨晚期糖基化终产物（AGEs）诱导心肌成纤维细胞老化的相关机制。方法: 用AGEs(200μg/ml)及抗-RAGE抗体(2μg/ml)、TGF-β/smad通路抑制剂（SB431542,10μM）干预乳鼠心肌成纤维细胞72h。观察老化相关指标β-半乳糖苷酶的活性及p16的表达；Western blot检测TGF-β，p-smad2/3，MMP-2的水平。结果:β-半乳糖苷酶的活性及p16的表达水平较对照组明显升高(p0.01)，伴有TGF-β、p-smad2/3、 MMP-2水平的显著增高，而给予抗-RAGE抗体或SB431542干预后，β-半乳糖苷酶的活性及p16的表达水平较AGEs组明显下降，同时TGF-β、p-smad2/3、 MMP-2的水平也显著下降。结论: 我们推测AGEs可与其受体RAGE作用诱导心肌成纤维细胞的老化，而TGF-β/smad信号通路可能参与了这一过程。 [关键词] AGEs，RAGE，TGF-β/smad，心肌老化 The aging and fibrosis effects of Advanced Glycation End products on cardiac fibroblasts [Abstract]Objective: To investigate the mechanisms of cardiac fibroblasts aging and fibrosis induced by advanced glycation end productcs(AGEs). Methods: Neonatal rat cardiac fibroblasts were incubated for 72h with AGEs(200μg/ml), anti-RAGE antibody (2μg/ml) and TGFβ/smad signaling pathway inhibitor (SB431542,10μM). Senescence-associated beta galactosidase activity and p16 were observed; MMP-2, TGF-β1, p-smad2/3 were measured by western blot. Results: After intervenced with AGEs for 72h, senescence-associated beta galactosidase activity, the level of p16 significantly increased compared with control group(p0.01), accompanied with evident elevation of the expressions of TGF-β1, p-smad2/3 and MMP-2, while senescence-associated beta galactosidase activity and the expression of p16 were remarkably down-regulated a