一种新的沙丁胺醇人工抗原的合成及单克隆抗体的-华南农业大学学报.pdf

　华南农业大学学报　２０１４，３５（１）：２３２８ ｈｔｔｐ： ｘｕｅｂａｏ．ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ∥ 　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　　　　　　　　　　　　　　ｄｏｉ：１０．７６７１／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１４１１Ｘ．２０１４．０１．００５ 陈观银，黄显会，刘晓云，等．一种新的沙丁胺醇人工抗原的合成及单克隆抗体的制备［Ｊ］．华南农业大学学报，２０１４，３５（１）：２３２８． 一种新的沙丁胺醇人工抗原的合成及 单克隆抗体的制备 １ １ ２ ２ １ １ １ 陈观银 ，黄显会 ，刘晓云 ，邓发亮 ，李帅鹏 ，孔祥凯 ，怀彬彬 （１华南农业大学兽医学院，广东广州５１０６４２；２广州万孚生物技术股份有限公司，广东广州５１０６４２） 摘要：【目的】为证明采用４－溴丁酸乙酯半抗原合成人工抗原可制备灵敏度高、特异性好的单克隆抗体．【方法】将 硫酸沙丁胺醇（ＳＡＬ）与４－溴丁酸乙酯反应制备半抗原（ＳＡＬＨＳ）；通过Ｎ－羟基琥珀酰亚胺活化酯法合成免疫原 与包被原，用聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外光谱和质谱方法对沙丁胺醇免疫原及包被原进行鉴定．免疫原免疫Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠，采用融合技术产生杂交瘤细胞株，体内诱生腹水法制备单克隆抗体，并鉴定其免疫学特性．【结果和结论】筛 选出１株杂交瘤细胞株，其细胞培养上清液效价达 １∶１２８０００，腹水效价达 １∶２５６００００，免疫球蛋白亚型鉴定为 ＩＧｇ１；抗体对沙丁胺醇的半数抑制浓度（ＩＣ ）为：０７４６ｎｇ／ｍＬ；与其他同类结构药物的交叉反应率均小于００１５％． ５０ 关键词：沙丁胺醇；单克隆抗体；胶体金；间接竞争ＥＬＩＳＡ 中图分类号：Ｓ８５９　　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１００１４１１Ｘ（２０１４）０１００２３０６ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆａｎｅｗｌｙｄｅｓｉｇｎｅｄａｒｔｉｆｉｃｉａｌａｎｔｉｇｅｎａｎｄｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆ ａｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔｓａｌｂｕｔａｍｏｌ １ １ ２ ２ ＣＨＥＮＧｕａｎｙｉｎ，ＨＵＡＮＧＸｉａｎｈｕｉ，ＬＩＵＸｉａｏｙｕｎ，ＤＥＮＧＦａｌｉａｎｇ， １ １ １ ＬＩＳｈｕａｉｐｅｎｇ，ＫＯＮＧＸｉａｎｇｋａｉ，ＨＵＡＩＢｉｎｂｉｎ （１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ； ２ＧｕａｎｇｚｈｏｕＷａｎｆｕＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏｐｒｏｖｅｔｈａｔｔｈｅａｒｔｉｆｉｃｉａｌａｎｔｉｇｅｎｗｈｉｃｈｗａｓｓｙｎｔｈｅｓｉｓｅｄｂｙ４ｂｒｏｍｉｎｅｅｔｈｙｌｂｕｔｙ ｒａｔｅｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ，ａｎｄｔｈａｔｔｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｈａｄａｈｉｇｈｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．【Ｍｅｔｈｏｄ】 Ｓａｌｂｕｔａｍｏｌｓｕｌｆａｔｅｗａｓｃｏｎｎｅｃｔｗｉｔｈ４ｂｒｏｍｉｎｅｅｔｈｙｌｂｕｔｙｒａｔｅ，ｔｈｅｎｃｏｎｖｅｒｔｅｄｉｎｔｏｈａｐｔｅｎ（ＳＡＬＨＳ）．Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎＳＡＬ