人类天冬胺酰基β-羟化酶的表达及其单克隆抗体的制备.pdf

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2011, April 25; 27(4): 659−666 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn ©2011 CJB, All rights reserved. 生物技术与方法 人类天冬胺酰基β-羟化酶的表达及其单克隆抗体的制备 呼延霆，尹大川，王伟，宋凯，王燕，卢慧甍，杨慧，薛小平 西北工业大学生命学院，西安 710072 摘 要: 旨在深入研究人类天冬胺酰基β-羟化酶 (HAAH) 在肿瘤早期诊断中的作用机制。应用RT-PCR 方法从肝癌组织 中获得人类天冬胺酰基β-羟化酶HAAH 编码基因，并在原核表达载体pBV-IL1 中进行融合表达，将Ni 柱纯化的融合蛋白 免疫Balb/c 小鼠，获得了3 株稳定的阳性单克隆细胞株 (H /E 、E /F 、G /D ) ，间接ELISA 和Western blotting 鉴定单 3 10 4 12 4 8 抗的特异性和灵敏度，以单抗H3/E 10 介导的间接免疫荧光检测HAAH 在各种肿瘤细胞系中的表达，可见特异的荧光。 试验中成功构建了可表达HAAH 基因的原核表达载体pBV-IL1-HAAH ，并制备了3 株抗HAAH 的单克隆抗体，为HAAH 的结构和功能的研究奠定了基础，同时也为进一步将该抗体应用于肿瘤的早期诊断以及研究HAAH 在肿瘤发生转移中 的机理提供了重要工具。 关键词: 人类天冬胺酰基 β-羟化酶，pBV-IL1 ，原核表达，单克隆抗体 Expression of human aspartyl β-hydroxylase and preparation of its monoclonal antibody Ting Huyan, Dachuan Yin, Wei Wang, Kai Song, Yan Wang, Huimeng Lu, Hui Yang, and Xiaoping Xue Faculty of Life Science, Northwestern Ploytechnical University, Xi’an 710072, China Abstract: We investigated the mechanism of human aspartyl β-hydroxylase (HAAH) in early diagnosis of tumors. The encoding gene of HAAH was cloned from the hepatic carcinoma by RT-PCR and expressed as a fused protein in the prokaryotic vector pBV-IL1. The expressed HAAH was purified by Ni2+-NTA purification column and the purified protein was then used to immunize Balb/c mice. Three hybridoma cell lines (respectively designated H /E , E /F and G /D ) stably expressing the monoclonal