BacTiter-Glo TM 微生物细胞活性检测.PDF

BacTiter-GloTM 微生物细胞活性检测 原英文技术手册号码：TB337 本说明书用于产品G8230, G8231, G8232 和G8233。 所有的技术文献均可从公司网站 得到 请访问公司网站以核准您所使用的技术手册为必威体育精装版版本 I. 描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1 II. 产品组成 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4 TM III. 进行BacTiter-Glo 检测的操作指南…………………………………. 5 A.试剂制备…………………………………………………………………………... 5 B.检测细菌中ATP 的操作方法…………………………………………………… 5 C.制作ATP 标准曲线（选做）的操作方法………………………………………… 5 Ⅳ. 附录………………………………………………………………………………….. 6 A. BacTiter-GloTM 检测概述………………………………………………………... 6 B. 更多的考虑………………………………………………………………………. 6 C. BacTiter-GloTM 检测应用举例………………………………………………….. 8 熟练使用者的操作指南………………………………………………………. 10 I. 描述 TM BacTiter-Glo 微生物细胞活性检测系统用均质的方法，依据对所存在的ATP 的定 量结果，确定培养物中活细胞的数目。ATP 是具有代谢活性的细胞的指示物。 TM BacTiter-Glo 的设计既可以用于单管检测，也可用于多孔板形式的高通量筛选 （HTS ）。均质的检测步骤意味着只需要直接向培养在培养基中的细菌细胞中加入一 次试剂（BacTiter-GloTM 试剂），然后测量萤光即可（图 1）。不需要洗涤细胞，去 除培养基，进行多次移液步骤等。 独特的试剂配方既可裂解细菌细胞，又可产生萤光信号，并支持这种“加入，混合， 测量”的均质检测格式。萤光信号与存在的ATP 量成正比，而ATP 与存在于培养 基中的细胞数目直接成正比（图2 ）。BacTiter-GloTM 试剂的基础有两点，其一是一 种受专利保护的热稳定萤光素酶（Ultra-GloTM 重组萤光素酶）的性质，其二是从细 菌中提取 ATP 的专利试剂配方。BacTiter-GloTM 检测产生“辉光型” 萤光信号， 由图3 所示的萤光素酶反应产生，其信号半衰期随菌株和培养基而不同，一般超过 30 分钟。数据表明这个检测可用于不同的细菌，酵母和真菌（表 1）。由于是均质 检测格式，所以减少了其它 ATP 测量方法由于需要多个步骤而可能带来的移液错 误。 注意：本中文操作手册仅供实验参考，在实际使用中请详细对照原英文技术手册TB337 。如遇到问题请与Promega 公司北京办事处联系，免费电话: 8008108133，E-mail: promega@ 技术手册号码：CTB337 第 1 页 共 10 页 优点 简化您的检测：加入、混合、测量方案将操作步骤减少到少于其它类似的ATP 检测 的数目，不需进样器。 很快得到结果：加入、混合试剂5 分钟之后就能记录数据。由于灵敏度高，可以更 早地检测到生长。 提高灵敏度：可以从少至10 个细菌细胞中