单克隆抗体及其电荷变体的IEX方法开发 - Waters.PDF

[ 应用纪要] 单克隆抗体及其电荷变体的IEX方法开发 Paula Hong, Kenneth J. Fountain, Thomas E. Wheat, Damian Morrison 应用优势 简介 ■ 确认单克隆抗体电荷变体的稳定方法 在过去20年中，包括单克隆抗体在内的生物治疗药物的应用发展迅 速。要完整地分析和表征这类复杂的大分子物质，我们必须采用正 ■ 简化方法开发过程并提高可重现性， 无需额外制备缓冲液 交分析技术。离子交换色谱(IEX)技术常被用于电荷异质性生物治疗 药物的分析。由于每种蛋白质都具有独特的电荷分布，因此可以通 ■ 在整个生产过程中监测生物制药电荷 过改变pH来调节色谱的选择性，但是，使用该方法进行分离通常分 变体的理想方法 离度不够且缺乏一致性，从而使得方法开发变得更加困难。为了解 决这些问题，我们开发了一种使用纯净溶液和浓缩储备液的溶剂管 理系统，该系统能够混合四种溶剂以制备和调整色谱流动相，并且 结合了高分离度离子交换色谱柱，可用于开发嵌合单克隆抗体中去 赖氨酸变体的分离方法。弱阳离子交换色谱柱使得我们能够在一系 列pH范围内使用多种缓冲液进行方法开发，以实现这些电荷变体的最 佳分离。本文将通过一种分析嵌合抗体的具体方法来阐述这一点。 沃特世解决方案 Protein-PakTM Hi Res IEX 色谱柱 ACQUITY UPLC® H-Class Bio 系统 Auto•Blend PlusTM 技术 关键词 IEX，单克隆抗体，Protein-Pak Hi Res ， 赖氨酸变体 1 [ 应用纪要] 实验 结果与讨论 样品描述：使用20 mM的MES缓冲液(pH=6)制备含 单克隆抗体的电荷异质性可能是由包括C端赖氨酸处理在内的多种结 1 C端去去赖氨酸变体的嵌合单克隆抗体样品，浓 构变化造成的 。当生物治疗药物具有电荷异质性时，我们通常会对 度为1.25 mg/mL。 整个生产过程中的电荷变体进行监测以确保对生产过程的控制。在 下面的研究中，我们开发了一种用于确认和定量分析嵌合单克隆抗 使用羧肽酶B (CpB)(Worthington Biochemical Corp.， 部件号LS005304)裂解C端赖氨酸，酶浓度为1 体药物中C端去去赖氨酸变体的IEX方法。