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应用化学系物理化学实验实验8
應應用用化化 學學系系物物理理化化 學學實實驗驗 實實驗驗 88.
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羧基羧基化螢光素化螢光素 p K及及 K 值之測量值之測量
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SV
Measurements of p K and KSV of Carboxyfluorescein
實驗報告重點實驗報告重點
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預預 報報 重重 點點
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現象與定義現象與定義
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1. 螢光光譜之基本原理 。Emission 與 Absorption 光譜之定義 。
2. 何謂螢光量子產率 ？影響螢光光譜訊號之變數有哪些?
3. 何謂螢光之消光 (quenching)現象 ? Stern-Volmer constant (KSV)及
quenching rate(k)之定義為何?
4. 繪製 carboxylfluorescein 分子並由網路資訊蒐尋 fluorescein 之螢光光譜
5. 溶液氧含量及 pH值對 carboxyfluorescein螢光訊號有何影響 ？
6. 何謂 pK? 如何使用螢光光譜技術測定 carboxyfluorescein 之 pK值？
請參考儀分課本( 以及定義與原理定義與原理作答 )
定義與原理定義與原理
測量與操作測量與操作
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1. carboxyfluorescein 之 absorption及 emission 光譜
2. 在不同 pH條件下之 carboxyfluorescein emission 光譜
3. 配製 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.7, 1, 4 µM carboxyfluorescein 樣品並測量其
emission 光譜
4. 配製 10份 0.2 µM carboxyfluorescein 樣品依次含有 0 至 200 mM 之碘化
鉀 (KI) ，pH=7 。
結結 報報 重重 點點
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1. 繪出 carboxyfluorescein 之 absorption及 emission 光譜 。標示結果。
2. 列表並作圖列表並作圖 ：[515 nm波長之螢光強度 vs pH ] ；並計算carboxyfluorescein pK
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值。
3. 列表並作圖列表並作圖 ：[515 nm波長之螢光強度 vs carboxyfluorescein濃度 ] ；討論濃
列表並作圖列表並作圖
度對螢光之影響 。
4. 列表並作圖列表並作圖 ：[螢光強度比值 (F /F) vs KI 濃度 ] ；F 是 [KI]=0時
列表並作圖列表並作圖 0 ] 0
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