3种不同方法对标本基因组DNA固定和抽提效果研究.pdfVIP

2008年4月 重庆师范大学学报(自然科学版) Apr．2008 第25卷 第2期 Journal of Chongqing Normal University(Natttral Science) V01．25 No．2 3种不同方法对标本基因组DNA 固定和抽提效果研究 黄 为，赵元著，唐安科 (重庆市动物生物学重点实验室重庆师范大学生命科学学院，重庆400047) 摘 要：利用常规基因组DNA抽提方法，对分别用甲醛、乙醇、聚乙二醇3种 固定液固定的鲫(Carassius auratus)肌 肉样品基因组DNA提取进行了比较研究。结果表明：5％甲醛保存的样品很难提取到完整的基因组DNA，乙醇95％ 和聚乙二醇(分子量为600)保存的样品均能成功提取出基因组DNA，并能成功地进行18S rDNA的扩增。同时探讨 了不同固定方法对基因组DNA提取的影响。 关键词：DNA提取；聚乙二醇；固定方法 中图分类号：Q33 文献标识码：A 文章编号：1672—6693(2008)02—0020—05 目前，分子系统学相关方法已经被广泛应用于 本实验室在改良传统标本的方法上，采用高分 物种的分类学研究之中 。其利用获得的特定靶 子水溶性塑料——聚乙二醇 (PEG)作为标本固定 基因进行序列的分析并构建分子系统树，结合形态、 剂，在前期系列研究中，已证明了其具有无毒、安全、 生理等经典分类学研究方法，就可以从多个层面上 便利等优点[17-18]，本研究利用不同保存方法下鲫肌 研究物种的多样性和亲缘关系。分子系统学的研究 肉样品基因组DNA提取的比较，旨在从分子层面验 首先必须获取含有足够遗传信息的生物样品和高质 证聚乙二醇作为标本固定液的可行性，同时为馆藏 量的DNA，所以利用活体样本作为提取．DNA的材 样品保存工作探求一条更加便捷而经济的途径。 料是最理想的。然而，由于自然环境的变迁和人类 1材料和方法 的干扰，目前许多物种处于濒危的状态或被保护状 态，这给获取新鲜标本造成困难。因此如何从馆藏 1．1材料 固定标本中获得需要的遗传信息成为了分子系统学 实验用鲫采于重庆市沙坪坝市场。样本处理参 需要解决的问题。目前保存的动物馆藏标本绝大多 见表1。 数是福尔马林或乙醇浸泡，虽然福尔马林固定具有 表1 不同保存液保存的样品 渗透力强、防腐杀菌效果好、固定速度快，能快速杀 Table l Samples treated in different fixative 死生物细胞以固定生物大分子的优点，但很多研究 表明，经福尔马林浸泡的样品，提取DNA都存在实 验方法繁琐、重复性差、提取得到的基因组DNA片 段较小等缺点，不利于后续进行的分子系统学研 究 。乙醇作为一种挥发性液体，在作为固定剂 使用中需要人工定时添加，增加了标本保存的繁琐 性。并且对标本完整形态也有一定的影响。因此， 1．2 DNA的提取及测量 寻找一种既能够很完好地保存标本，又不影响其高 梯度稀释浸泡方法：a)将95％乙醇保存和5％ 质量DNA的提取，并且安全便利的固定剂，是目前 甲醛保存的标本样品取出，分别置于浓度梯度为 动物馆藏标本保存所迫切需要解决的问题。 60％，30％，10％的乙醇和灭菌纯水中浸泡 (每个梯 收稿日期：2008—03一Ol 资助项目：重庆市市级动物学精品课程建设项目 作者简介：黄为(1982一)，男，硕士生，研究方向为鱼类寄生虫学。通讯作者：赵元著，E—mail：